제품설명

본 효소는 circular 형태의 supercoiled DNA를 knotting/unknotting하는 효소이다. Single stranded, circular DNA에서 매듭(knot)을 만들거나 (knotting) 푸는 (unknotting) 작용을 한다. 또한 두개의 Circular 형태의 상보적인 단일 가닥 DNA에서 닫힌 이중 가닥 circular DNA를 형성할 수 있다. 마지막으로, 두개의 이중 가닥 circular DNA중 하나에 nick이 있을 경우, 두 분자를 연결 (catenation)하거나 혹은 분리 (decatenation)할 수 있다.

보존 -20℃

농도 20 U/㎕

형상

20 mM		Potassium phosphate (pH7.2)
50 mM		KCl
0.05 mM		EDTA
1 mM		DTT
0.02%		BSA
50%		Glycerol

첨부 buffer 조성 (10x)

350 mM		Tris-HCl (pH8.0)
720 mM		KCl
50 mM		MgCl₂
50 mM		DTT
50 mM		Spermidine
0.1%		BSA [별첨]

촉매반응

1. Circular DNA의 supercoil 상태를 이완
2. 단일 가닥의 circular DNA 분자에 매듭을 만들거나 (knotting) 푸는 (unknotting) 작용
3. 상보적인 염기 서열을 가진 단일 가닥의 circular DNA로 이중 가닥의 닫힌 순환 DNA 분자를 형성
4. 2개의 이중 가닥의 circular DNA중 어느 한 분자에 DNA 사슬의 breakage가 존재할 경우 두 분자의 연결(catenation), 혹은 그 반대의 반응(decatenation)

활성의 정의

37℃에서 0.5 ㎍ / 50 ㎕의 supercoiled pBR322 DNA를 30 분간 100% relaxed form으로 전환하는 효소 활성을 1U으로 한다.

활성 측정용 반응액 조성

35 mM		Tris-HCl (pH8.0)
72 mM		KCl
5 mM		MgCl₂
5 mM		DTT
5 mM		Spermidine
0.01%		BSA
0.5 ㎍ / 50 ㎕		Supercoiled pBR322 DNA

사용상의 주의

- 첨부된 buffer는 spermidine (최종 농도 5 mM)이 첨가되어 있다. Spermidine 미 첨가 시, 효소 활성이 1/20정도로 저하될 수 있다
- pBR322 DNA나 Φ X174 DNA의 RF I (supercoil 분자)를 DNA Topoisomerase I으로 반응한 후에도, EtBr을 포함한 gel에서는 전기영동시 밴드의 위치에 변화가 일어나지 않는다.
이는 DNA Topoisomerase I에 의한 relax형의 DNA가 EtBr의 영향으로 다시 supercoil 상태가 되기 때문이다.
따라서 DNA Topisomerase I 활성 측정시에는 EtBr을 포함하지 않은 agarose gel에서 전기영동 후 EtBr로 염색해야 한다.
- 10X 첨부 buffer에 0.1% BSA를 바로 넣을 경우 대량의 백색 침전이 생기므로 반응액을 조제할 때 다음의 순서로 시약을 첨가한다.
멸균 정제수 → 10X 첨부 buffer → 0.1% BSA → 기질 DNA
- 본 효소는 유리나 플라스틱에 강한 흡착성이 있어 반응할 때 BSA (Bovine Serum Albumin)을 첨가하는 것이 바람직하다.

용도

- DNA의 구조 변환과 해석

기원

Calf thymus

일반적 성질

- 저해제: 0.2 M 이상의 1가 양이온 (K⁺, Na⁺)