제품설명
RNAi는 siRNA라는 21 ~ 23 mer의 이중 가닥 RNA에 의해 배열 특이적으로 유전자 발현이 억제되는 현상입니다. 이 프로세스는 긴 dsRNA 가 Dicer에 의해 21 ~ 23 mer의 짧은 siRNA에 처리된다. 생성된 siRNA는 RNA - induced silencing complex (RISC)에 의해 형성되고,이 복합체가 표적 mRNA를 절단을 할 것으로 알려져 있다. 인간 유래의 Dicer는 이미 복제 및 발현이 이루어지고 있으며, 재조합 체를 이용한 효소 특성에 대해서도 분석이 진행 중이다.
또한 재조합 체 Dicer를 이용하여 긴 dsRNA를 절단하고 쉽게 siRNA 혼합물 (siRNA cooktail)를 얻는 방법이 개발 되고 있다. 이 siRNA 혼합물에는 여러 종류의 siRNA를 포함하기 때문에 특정 siRNA 배열을 디자인 할 필요 없이 보다 간편하고 효율적으로 RNAi 실험을 할 수 있다.
다카라 바이오가 개발한 ColdShock - DICER은 인간 유래 Dicer의 변이체 단백질과 dsRNA 절단 시 효율을 상승시키는 콜드 쇼크 단백질 (Thermotoga maritima 유래)를 혼합한 것으로, 300 ~ 1000 bp의 긴 dsRNA를 효율적으로 분해하여 RNAi 실험에 적합한 약 21 mer의 siRNA 혼합물을 제작 할 수 있다 (아래 그림 참조).
M：siRNA Ladder Marker
1：dsRNA (약500 bp)
2：ColdShock-DICER 의한 절단
3：합성siRNA

＜절단조건＞
ColdShock-DICER：37℃、18시간

그림 ColdShock - DICER의 긴 사슬 dsRNA (약 500 bp)의 절단 결과

본 제품은 반응용 버퍼가 첨부되어있다.
내용
농도 : 1 unit / μl
첨부 시약
1. 5 × ColdShock - DICER Buffer :
100 mM Tris - HCl (pH8.5), 750 mM NaCl, 12.5 mM MgCl2
2. Stop Solution (120 mM EDTA)
저장
-80℃
ColdShock-DICER (TmCspB and fragment of h-Dicer)
  • 활성의 정의
    37 ℃, 약 700 bp의 dsRNA 1ug 을 18 시간 반응 하여 분해하는 양을 1 unit로 한다
  • 활성 측정용 반응액 조성
    20 mM Tris-HCl, pH8.5
    150 mM NaCl
    2.5 mM MgCl2
    1 μg/10 μ dsRNA