Á¦Ç°¼³¸í
º» È¿¼Ò´Â ´ÜÀÏ °¡´ÚÀÇ DNA¿Í RNA, ƯÈ÷, AT- ¶Ç´Â AU rich regionÀ» ¿ì¼±ÀûÀ¸·Î ºÐÇØÇÏ´Â endonucleaseÀÌ´Ù. ÀÌÁß °¡´Ú DNA ¶Ç´Â RNA ¶ÇÇÑ ºÐÇØÇÒ ¼ö ÀÖÀ¸¸ç À̸¦ ÅëÇØ chromatin immunoprecipitation(ChIP) assay¿¡ »ç¿ëÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù. DNA¿Í RNAÀÇ 5¡¯-phosphodiester °áÇÕÀ» ºÐÇØÇϰí 3¡¯-P mononucleotide ¶Ç´Â oligonucleotide¸¦ ¹æÃâÇÑ´Ù.
º» È¿¼ÒÀÇ È°¼º¿¡´Â Ca2+ ÀÌ¿ÂÀ» ÇÊ¿ä·Î Çϸç EDTA¿Í EGTA¿¡ ÀÇÇØ¼ ¿ÏÀüÈ÷ ½ÇȰµÈ´Ù.
º¸Á¸ -20¡É
³óµµ : 20 U/§¡
Çü»ó
50 mM |
|
Tris-HCl (pH8.0) |
1 mM |
|
DTT |
50 mM |
|
NaCl |
50% |
|
Glycerol |
÷ºÎ buffer Á¶¼º (10x)
200 mM |
|
Tris-HCl (pH8.0) |
50 mM |
|
NaCl |
25 mM |
|
CaCl2 |
Ȱ¼ºÀÇ Á¤ÀÇ
37¡É, pH8.0¿¡¼ ¿º¯¼º ¼Û¾ÆÁö Èä¼± DNA¸¦ ±âÁú·Î 30 ºÐ°£ 1 OD260ÀÇ »ê¼ºÀÎ °¡¿ë¼ºÀÇ ºÐÇØ¹° (acid-soluble products)À» »ý¼ºÇÏ´Â È¿¼ÒȰ¼ºÀ» 1 UÀ¸·Î ÇÑ´Ù.
Ȱ¼º ÃøÁ¤¿ë ¹ÝÀÀ¾× Á¶¼º
20 mM |
|
Tris-HCl (pH8.0) |
5 mM |
|
NaCl |
2.5 mM |
|
CaCl2 |
0.5 §· / §¢ |
|
¿º¯¼º ¼Û¾ÆÁö Èä¼± DNA |
»ç¿ë»óÀÇ ÁÖÀÇ
- º» È¿¼ÒÀÇ È°¼ºÀº Ca2+ À̿¿¡ ¸Å¿ì ÀÇÁ¸ÀûÀ̸ç, EDTA ȤÀº EGTA¿¡ ÀÇÇØ ¹ÝÀÀÀ» ¸ØÃâ ¼ö ÀÖ´Ù.
¿ëµµ
- Crude cell extract¿¡¼ ÇÙ»ê ºÐÇØ
- NucleosomeÀ» Á¶Á¦Çϱâ À§ÇÑ ¿°»öÁú ºÐÇØ
- Chromatin immunoprecipitation(ChIP)
±â¿ø
Staphylococcus aureus ¹è¾ç »óÃþ¾×
ÀϹÝÀû ¼ºÁú
- ºÐÀÚ·®: 16,800
- º¸Á¶ÀÎÀÚ: Ca2+¸¦ ÇÊ¿ä·Î ÇÑ´Ù.