Á¦Ç°¼³¸í
pDON-AI-2 DNA´Â °íÈ¿À² À¯ÀüÀÚ µµÀÔ¿ë retrovirus vectorÀÌ´Ù. º» vector´Â LTR°ú packaging signal (¥× ¼­¿­) ÀÌ¿ÜÀÇ MoMLV À¯·¡ À¯ÀüÀÚ (gag, pol, env)¸¦ Æ÷ÇÔÇÏÁö ¾Ê°í 5¡¯LTRÀÇ U3 ¿µ¿ªÀÌ º¸´Ù °­·ÂÇÑ cytomegalovirus À¯·¡ÀÇ promoter·Î ġȯµÇ¾î Àֱ⠶§¹®¿¡ Àü»ç È¿À²ÀÌ ³ô´Ù. µû¶ó¼­ °í¿ª°¡ÀÇ ÀçÁ¶ÇÕ retrovirus¸¦ ¾òÀ» ¼ö ÀÖ´Ù. ¶ÇÇÑ ¼¼Æ÷¿¡ µµÀÔÇÑ ÈÄÀÇ ¸ñÀûÀ¯ÀüÀÚÀÇ ¹ßÇö È¿À²À» ³ôÀ̱â À§ÇÏ¿© cloning ºÎÀ§ ¾ÕÂÊ¿¡ human actin À¯·¡ÀÇ intron °ú splice acceptor°¡ À§Ä¡Çϰí ÀÖ´Ù. ¶ÇÇÑ, pDON-AI-2 Neo DNA (Code 3653)´Â selection marker·Î½á neomycin ³»¼ºÀ¯ÀüÀÚ¸¦ °¡Áö°í ÀÖ´Ù.
º» Á¦Ç°À» ÀÌ¿ëÇϸé pMEI-5 ½Ã¸®Áî¿¡ ºñÇØ °í¿ª°¡ÀÇ ÀçÁ¶ÇÕ retrovirus¸¦ ¾òÀ» ¼ö ÀÖ°í, È¿À²ÀûÀÎ À¯ÀüÀÚ µµÀÔÀÌ °¡´ÉÇÏ´Ù.
(º» vector´Â S. Kim¿¡ ÀÇÇØ °³¹ßµÈ retrovirus vector Á¦ÀÛ¿ë plasmid vector pDON-AI DNA¸¦ º¯ÇüÇÑ °ÍÀÌ´Ù.)
Retrovirus¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ À¯ÀüÀÚµµÀÔÀÇ Æ¯Â¡
Ç¥Àû¼¼Æ÷¿¡ ¸ñÀûÀ¯ÀüÀÚ¸¦ µµÀÔÇÏ¿© ¹ßÇö½ÃŰ´Â ¹æ¹ý¿¡´Â electroporation µîÀÇ ¹°¸®Àû ¹æ¹ý°ú DEAE-dextranÀ̳ª ¸®Æ÷Á» (liposome), calciumphosphate µîÀ» ÀÌ¿ëÇÏ´Â È­ÇÐÀû ¹æ¹ýÀÌ ÀÖ´Ù. ÀÌ ¿Ü¿¡µµ ¹ÙÀÌ·¯½º º¤Å͸¦ ÀÌ¿ëÇÑ ¿Ü·¡ À¯ÀüÀÚÀÇ °íÈ¿À² µµÀÔ¹ý ¿¬±¸µµ ÁøÇàµÇ°í ÀÖÀ¸¸ç, ÇöÀç »ç¿ëµÇ°í ÀÖ´Â ´ëÇ¥ÀûÀÎ ¹ÙÀÌ·¯½º º¤ÅÍ¿¡´Â ·¹Æ®·Î¹ÙÀÌ·¯½º, ¾Æµ¥³ë¹ÙÀÌ·¯½º(adenovirus), adenovirus associated virus, vaccinia virus µîÀÌ ÀÖ´Ù. ƯÈ÷ ·¹Æ®·Î¹ÙÀÌ·¯½º º¤Å͸¦ ÀÌ¿ëÇÑ À¯ÀüÀÚ µµÀÔ¿¡´Â ´ÙÀ½°ú °°Àº ÀåÁ¡ÀÌ ÀÖ´Ù.
Çü»ó
10mM    Tris-HCl (pH8.0)
  1mM    EDTA
±æÀÌ
pDON-AI-2 Neo DNA : 5,719 bp
pDON-AI-2 DNA        : 4,586 bp
pDON-AI-2 DNAÀÇ ±¸Á¶
»ç¿ë»óÀÇ ÁÖÀÇ
pDON-5-DNA, pMEI-5 DNA¸¦ »ç¿ë½Ã ´ÙÀ½ »çÇ׿¡ ÁÖÀÇÇÏ¿© ÁֽʽÿÀ.
1. º» Á¦Ç°Àº ¿¬±¸ ¸ñÀû À̿ܿ¡´Â »ç¿ëÇÒ ¼ö ¾ø½À´Ï´Ù. Àΰ£, µ¿¹°ÀÇ ÀÇ·á, ÀÓ»ó Áø´Ü µî¿¡´Â »ç¿ëÇÏÁö ¾Êµµ·Ï ÁÖÀÇÇÏ¿© ÁֽʽÿÀ.
   (º» Á¦Ç°¿¡ ÀÇÇØ ¾ò¾îÁø »ý¹°Àç·á¸¦ Á¦3ÀÚ¿¡°Ô ¾çµµÇÒ ¼ö ¾ø½À´Ï´Ù.) ¶Ç, ½Äǰ, È­Àåǰ, »ýȰ¿ëǰ µîÀ¸·Î »ç¿ëÇÏÁö ¸¶½Ê½Ã¿À.
2. º» Á¦Ç°À» ¿¬±¸ ¸ñÀû À̿ܿ¡ »ç¿ëÇÏ´Â °æ¿ì¿¡´Â »çÀü¿¡ ´ç»ç¿¡ ¹®ÀÇÇϽʽÿÀ.

3. º» retrovirus vector¿¡ ÀÇÇØ »ý»êµÇ´Â ¹ÙÀÌ·¯½º »óû »ðÀÔ Á¶°¢¿¡´Â À§ÇèÇÑ ¹ÙÀÌ·¯½º°¡ Æ÷Ç﵃ À§ÇèÀÌ Àֱ⠶§¹®¿¡ ÀçÁ¶ÇÕ retrovirusÀÇ »ý»ê°ú
    Ãë±Þ¿¡´Â ÀûÀýÇÑ Á¶Ä¡¸¦ ÃëÇÒ Çʿ䰡 ÀÖ½À´Ï´Ù. ÀÌ¿ë ½Ã °üÇÒ ºÎó ¹× Á¶Á÷ ¾ÈÀüÀ§¿øÈ¸°¡ Á¤ÇÑ ÀçÁ¶ÇÕ DNA½ÇÇè ÁöħÀ» µû¶ó ÁֽʽÿÀ.
4. º» Á¦Ç°ÀÇ »ç¿ëÀ¸·Î ÀÎÇÑ ¾î¶°ÇÑ »ç°í, ¼ÕÇØ¿¡ ´ëÇØ¼­µµ ´ç»ç¿¡¼­´Â Ã¥ÀÓÀ» ÁöÁö ¾Ê½À´Ï´Ù.