1~1,000개 정도 세포 혹은 20 pg~20 ng의 total RNA에서 효율적으로 cDNA 증폭 가능
미량 샘플에서도 다양한 유전자의 Real Time PCR 해석 가능
프로토콜 최적화 통해 저발현 유전자까지 효율적으로 증폭 가능

제품 설명

본 제품은 소수의 세포(1~1000개)를 이용하여 바로 cDNA를 증폭하는 제품이다. 증폭된 cDNA는 Real Time PCR 주형으로 사용할 수 있다. 일반적으로 미량의 핵산을 이용할 때, 정제에 의한 소실이 문제가 되지만, 이 제품을 이용하면 RNA나 cDNA 정제없이 효율적으로 cDNA를 증폭할 수 있다. 본 제품에서는 우선 세포를 용해하여, dT-adaptor primer(RT dT Primer 2)를 이용한 역전사 반응 후, mRNA로부터 cDNA를 합성한다. 그 다음에 합성한 cDNA에 TdT로 dA-tail를 부가한 후, 이것을 주형으로 하여 PCR cycle 수를 줄여 cDNA를 증폭한다.
본 제품은 세포에서 직접 cDNA 증폭할 수도 있고, 미량의 RNA(20 pg~20 ng)에서 cDNA 증폭할 수도 있다.
Ver.2에서는 Exonuclease I처리 과정을 추가하여, 기존 제품에 비해 프라이머 유래의 비특이적 증폭을 억제하여 발현량의 적은 유전자의 증폭 효율을 향상시켰다.

내용

(5 μl반응시, 100회분)
1. Lysis Buffer（4×）	150 μl
2. Recombinant RNase Inhibitor（40 U/μl）	30 μl
3. RT dT Primer 2	12 μl
4. dNTP Mixture（2.5 mM each）	12 μl
5. MgCl₂（22.5 mM）	36 μl
6. RT Enzyme Mix 2^*1	36 μl
7. Exonuclease I（5 U/μl）	72 μl
8. TdT Buffer（5×）	144 μl
9. dATP（90 mM）	24 μl
10. TdT Enzyme Mix^*2	54 μl
11. PCR Primer Mix 2	300 μl
12. RNase Free dH₂O	1 ml

^*1 PrimeScript Reverse Transcriptase、RNase Inhibitor 포함.
^*2 Terminal Deoxynucleotidyl Transferase、RNase H 포함.

보존

- 20 ℃

본 제품 사용시 필요한 시약 및 기기 (주요 품목)

PCR 시약
- TaKaRa Ex Taq Hot Start Version(Code RR006A/B)
1.5 ml microtube
0.2 ml microtube
Micropipette 및 tip
PCR Thermal Cycler

실험과정

Real Time RT-PCR용 primer 제작서비스「Perfect Real Time Support System」

Perfect Real Time Support System은 intercalator 법(SYBR Green I검출)을 이용한 Real Time RT-PCR용으로 최적화된 프라이머를
검색·온라인 주문하기 위한 시스템이다.
Human, mouse, rat, dog, chicken, bovine의 RefSeq 등록 유전자에 대한 전반적인 Real Time RT-PCR용 프라이머 설계가 가능하다.
타겟 유전자를 검색하여, 원하는 프라이머 세트를 선택하면 간단하게 온라인으로 주문 가능하다. 번거로운 프라이머 설계와 반응 조건 최적화가 불필요(TAKARA Real Time PCR reagent에 최적화) 하며, siRNA의 효과의 확인, DNA Microarray 해석 결과 검증 등 유전자 발현 정량이나 유전자 검출에 간편하게 사용할 수 있다.

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