내용
Enzyme/Oligo Set (20 회)
Annealing Buffer 40 ㎕
Extension Buffer 60 ㎕
T4 DNA Ligase (60 U/㎕) 20 ㎕
T4 DNA Polymerase (1 U/㎕) 20 ㎕
Selection Primer (5 pmol/㎕) 20 ㎕
Control dsDNA Solution (pKF19 kM dsDNA 50 fmol/㎕) 5 ㎕
Control Synthetic Oligonucleotide Solution (50 pmol/㎕) 5 ㎕

벡터/Host Set
pKF18k-2 DNA (10 OD/ ㎖) 10 ㎕
pKF19k-2 DNA (10 OD/ ㎖) 10 ㎕
E. coli BMH71-18 mutS (10% Glycerol Solution) 100 ㎕
E. coli MV1184 (10% Glycerol Solution) 100 ㎕
* Mutan-Express Km 벡터/Host Set (TaKaRa Code 6091) 중 pKF 18K DNA, pKF 19K DNA는 각각 pKF 18k-2 DNA, pKF 19k-2 DNA로 명칭이 변경되었지만, 제품 내용은 변경되지 않았다. 제품의 코드번호, 가격, 포장량도 동일하다.
보존
Enzyme/Oligo Set : -20℃
벡터/Host Set : -80℃ (동결, 융해의 반복을 피한다)
각종 Buffer의 조성
1. Annealing Buffer (40 ㎕)
200 mM Tris-HCl (pH7.5)
100 mM MgCl2
500 mM NaCl
10 mM DTT
2. Extension Buffer (60 ㎕)
100 mM Tris-HCl (pH7.5)
20 mM DTT
10 mM ATP
5 mM each dNTPs (A,C,G,T)
제품설명
본 제품은 “ODA”(Oligonucleotide-directed Dual Amber)법을 시스템화하여, site-directed mutagenesis를 가능한 한 간편한 조작으로 수행할 수 있도록 고안된 키트이며, 유전자나 단백질의 기능해석, 구조 변경 등에 위력을 발휘한다.
키트외에 필요한 시약
ODA법 (Oligonucleotide-directed Dual Amber법)의 원리
플라스미드 벡터 pKF18k-2/19k-2는 Km (kanamycin) 내성 유전자 상에 이중의 amber 변이를 갖고 있기 때문에 숙주균으로 supE 주 (JM109 등)를 사용하는 경우만이 증폭가능하다. 우선 이 벡터에 변이를 도입하고자 하는 DNA 단편을 클로닝하여 열처리로 ssDNA를 형성시킨 후, 목적의 변이용 oligonucleotide와 Km 유전자 상의 amber를 복귀시키기 위한 Selection Primer를 동시에 hybridization한다. 계속하여 polymerase/ligase 반응에 의해 상보가닥을 합성하고 supE/mutS 주에 도입하면 DNA는 mismatch의 수복을 억제하면서 복제한다. 그 다음은 sup0 주에서만 증식 가능한 DNA를 선택하므로써 목적의 변이가 도입된 DNA를 높은 효율로 얻을 수 있다.


그림 ODA법의 원리
License Notice : [M22]