Retro-X Concentrator로 retrovirus의 역가를 100 배까지 증가시킬 수 있으며, 더 많은 바이러스를 만들거나, 추가로 packaging 세포에 transfection할 필요 없이 충분히 높은 MOI로
목적세포를 감염시킬 수 있다.
Simple 조작과정: Mix, Wait 그리고 Spin
Retro-X Concentrator는 빠르고, 간편하며 어떠한 종류의 retrovirus stock도 농축시킬 수 있는 아주 효율적인 방법을 제공한다. 우선 retrovirus 상층액을 Retro-X Concentrator 시약과 섞은 후 하룻밤 반응시킨 후 반응액을 일반 원심분리기로 원심분리한다 (Figure 1). 상층액의 양과 viral envelope에 따라 MMLV 또는 MSCV에 기반을 둔 retroivirus의 역가를
100 배까지 증가시킬 수 있으며 (Figure 2), 높은 회수율을 얻을 수 있다. Clontech의 Retro-XSystem의 모든 retroiviral vector 뿐만 아니라 다른 모든 retroivirus의 상층액을
Retro-X Concentrator로 농축할 수 있으며 필요에 따라 용량을 증감할 수 있다.
Table I: Retro-X Concentrator vs. Ultracentrifugation
Feature Retro-X Concentrator Ultracentrifugation
Easily Scalable Yes No
Specialized Equipment No Yes
Ease-of-Use ++++ +
100 배까지 역가 증가
Retro-X Concentrator을 사용하면 다양한 envelope-pseudotyped retroivirus의 상층액 10 ml을 100 μI로 농축하여 역가를 46~116 배까지 증가시킬 수 있다 (Figure 2).
초고속원심분리보다 더욱 간단한 방법
Retro-X Concentrator과 초고속원심분리 방법을 비교하였을 경우, Retro -X 방법의 장점은 매우 명확하다 (Table 1). Retro-X Concentrator는 초고속원심분리 방법보다 더 쉽고 융통성이 있다. Retro-X Concentrator 시약은 4x 농도의 시약으로 제공되기 때문에 상층액에 포함된 바이러스의 양과 역가에 상관없이 사용할 수 있다. 상층액 250 ml 까지도 적용 가능하다.
Figure 1. The Retro-X Concentrator protocol. Add Retro-X Concentrator reagent to clarified viral supernatant, incubate overnight at 4°C, and spin. That’s it.
Figure 2. Retro-X Concentrator increases virus titer by up to 100-fold. Retrovirus expressing DsRed2 was packaged using the Retro-X Universal Packaging System and four different viral envelopes. Retro-X Concentrator was used to concentrate dualtropic (10A1), amphotropic (Ampho), ecotropic (Eco), and VSV-G (pantropic) pseudotyped retrovirus samples from 10 ml down to 100 μl (Panels A & B). Crude and concentrated viral stocks were then titrated on HT1080 or NIH 3T3 cells and analyzed via flow cytometry at 72 hr postinfection to determine the percentage of transduced cells.
Components & Storage Conditions
각 제품 구성물과 보관조건은 Certificate of Analysis 를 참조하십시오.