- 10 cm plate 당 108 IFU/ml 이상 획득
- 가장 안전한 lentivirus packaging system
- VSV-G 와 ecotropic pseudotypes 이용 가능
- Lenti-X 293T Cell Line과 함께 사용 시 최적
HT = High Titers
Clontech의 Lenti-X HT Packaging System은 기존의 상용화된 packaging system과 비교 시 월등한 packaging 능력과 뛰어난 역가 (titer)를 보인다(Figure 1). 108 IFU/ml까지의 역가를 얻을수 있어 농축되지 않은 바이러스 상청액 10μl 를 이용하여 plate 상의 목적 세포 전체로 형질도입 할 수 있다(Figure 2 & Figure 3). 본 시스템은 목적 유전자의 copy 수를 증가시켜 발현 수준을 증가시키기 위하여 multiplicity of infection (MOI)을 조절할 수 있게 한다.
시너지 효과 : 높은 역가를 위한 해답
아래의 구성요소를 293T 세포와 함께 사용하면 Clontech의 Lenti-X System Vector 뿐만 아니라 다른 lentivirus vector를 이용할 때도 최고 역가의 안전한 lentivirus를 생산할 수 있다.
- 최적화된 Packaging Mix - Clontech의 Lenti-X HT Packa-ging Mix는 바이러스 용 구성요소와 비바이러스 용 packaging 구성요소로 구성되어 있다. 또한, 바이러스 생산을 최대화할수 있도록 관련 vector들을 최적의 비율로 혼합한 premix로 제공된다.
- Tet System Transactivation - Tetracycline-responsive promoter element(TRE)의 Tet-Off transactivation을 통하여 packaging에 필요한 몇 가지 주요 구성요소들을 고도로 발현시킨다. HEK293 기반의 cell lines에서 Tet System 유도발현은 CMV promoter에 의해 생산되는 다른 시스템에서 보다 훨씬 높은 발현을 이끌어낸다 (1).
- 최적화된 transfection - Calcium phosphate precipitation법은 293T 세포에서 고효율의 비독성 transfection을 가능하게 하며, lipid-based transfection 법보다 더 높은 발현을 유도한다. LentiphosTM HT는 293T packaging cells에 최적화되어 있으며, 99% 이상의 transfection 효율을 얻을 수 있다. 최적화된 pH와 buffer 조성, 염농도, 반응 용량과 함께 간단한 실험 조작 과정은 최적의 transfection을 보장한다.
2 종의 Viral Pseudotypes 이용
일반적인 Lenti-X HT Packaging System은 모든 종류의 세포에 즉시 감염시킬 수 있는 VSV-G pseudotype의 바이러스를 생산한다. Lenti-X HT Ecotropic Packaging System은 MLV ecotropic envelope glycoprotein(gp70)을 가진 pseudotype의 바이러스를 생산한다. 이것은 mouse나 rat 세포에 고효율로 형질도입 시킬 수 있다.
Lenti-X 293T Packaging Cell Lines
Clontech에서 특화된 Lenti-X 293T Cell Line은 높은 형질도입이 가능하고 바이러스 단백질을 고발현할 수 있도록 지원해 준다 (1). 이런 특성은 Lenti-X HR Packaging System을 이용하여 최고의 lentivirus 역가 (108 IFU/ml 이상)를 생산할 수 있게 한다. Lenti-X HT Packaging System과 Lenti-X vector를 이용하여 Lenti-X 293 Cell Line과 다른 2 개의 HEK 293 계열 cell lines의 바이러스의 생산량을 비교했을 때 clontech의 Lenti-X 293T 세포가 293FT 세포보다 6 배, HEK293 cell lines보다는 30 배 이상 높은 바이러스 생산 효율을 보였다.
Figure 1. The Lenti-X HT Packaging System. The lentiviral vector pLVXPuro and the Lenti-X HT Packaging Mix are cotransfected into Lenti-X 293T cells using the highly efficient Lentiphos HT transfection system. High titer supernatants are ready for use 48 hr after transfection.
Figure 2. High infectivity of supernatants produced by the Lenti-X HT Packaging System. The Lenti-X HT Packaging System and a Lenti-X vector (Panel A) and a competitor’s packaging system and vector (Panel B) were each used to generate lentivirus for ZsGreen1 fluorescent protein expression. As little as 10μl of culture supernatant from the Lenti-X HT Packaging System transduced the majority of a HeLa cell culture, whereas 10μl of supernatant from the competitor’s system transduced only a small percentage of the cells. Transduced cells were quantified by flow cytometry.
Figure 3. Lentiphos HT preserves 293T cell viability and allows production of more lentivirus. Virus production from Lenti-X 293T cells transfected with the Lenti-X HT Packaging System using a Lenti-X ZsGreen1 expression vector and Lentiphos HT transfection (Panels A & B), was compared to a competitor’s packaging system and vector using their 293T cells and lipid-based transfection method (Panels C & D). After 48 hours, cell health and ZsGreen1 expression were visualized using phase contrast microscopy (Panels A & C) and fluorescence microscopy (Panels B & D). The Lenti-X culture produced a titer of 5.1 x 108 IFU/ml, whereas the competitor’s system produced a titer that was 25-fold lower.
Figure 4. Transduction of neural progenitor cells by a Lenti-X lentivirus. ZsGreen1-expressing lentivirus was produced from the Lenti-X HT Packaging System and used to transduce normal human neural progenitor cells. A single transduced cell is shown under phase contrast microscopy (Panel A) and fluorescence microscopy (Panel B).
Components & Storage Conditions
각 제품 구성물과 보관조건은 Certificate of Analysis 를 참조하십시오.
References
1. Yin, D. X. et al. (1996) Anal. Biochem. 235:195-201.