SMART mRNA Amplification Kit는 제한된 시료로부터 대량의 sense RNA(또는 mRNA)를 빠르고 쉽게 합성할 수 있는 제품이다. 따라서, 불충분한 양의 RNA를 이용하여 유전자의 발현 양상 및 구조적, 기능적 연구를 수행하고자 할 경우 이 제품을 사용하여 RNA를 대량으로 증폭할 수 있으며, 합성된 RNA는 상대적으로 풍부한 수의 cDNA를 유지한다.
최상의 결과를 보장하는 SMART 기술
SMART mRNA amplification 법은 역전사 효소와 특허받은 SMART 기술을 결합하여 full-length cDNA를 합성할 수 있다.
먼저 3、-말단에 부가적으로 특정서열을 가지고 있는 변형된 oligo(dT) primer (CDS Primer II A)를 이용하여 1st strand cDNA를 합성한다 (Figure1). MMLV RT효소가 mRNA의 5、-말단에 도달하면 terminal transferase 활성을 이용하여 새로 합성된 cDNA 말단에 몇 개의 부가적인 nucleotide 를 붙이는데 일반적으로 deoxycytidine이 부가되어 dC-rich cDNA tail을 형성한다.
그 후 T7 RNA polymerase promoter서열을 가지고 있는 SMART T7 oligonucleotide가 dC-rich cDNA tail과 base pair를 형성하면 MMLV RT효소는 RNA 주형에서 SMART T7 oligonucleotide로 template를 바꾸어 계속 RNA 가닥을 합성하게 된다 (1). 그 결과 SMART T7 oligonucleotide와 상보적인 5、-말단 서열을 가지는 full-length 1st strand cDNA가 합성된다.
그 후 SMART T7 anchor 서열을 primer로 사용하여 ds cDNA를 합성한다.
마지막으로 T7 RNA polymerase와 제한된 양의 ribonucleotide를 이용하여 sense strand RNA (mRNA)를 in vitro transcription으로 대량 증폭한다.

이 방법은 한 번의 증폭 과정으로도 후속 실험에 필요한 충분한 양의 mRNA를 확보할 수 있으며, 유전자의 표현 양상도 그대로 유지되도록 한다.
SMART mRNA Amplification Kit는 array probe 제작 뿐만 아니라 qRTPCR, in vitro translation이나 cDNA cloning 같은 실험에도 적합하다. SMART mRNA는 일반적인 labeling 프로토콜에 사용되는 total RNA를 대체할 수 있으며 결과적으로 더 낮은 background와 더 높은 signal로 검출 범위를 증가 시킬 수 있다.

실험 전 human RNA의 quality를 RNA/cDNA Quality Assay를 사용해 확인할 수 있다. 이 제품은 RT-PCR 법을 사용하기 때문에 실제 실험시 fulllength cDNA를 어느 정도 증폭할 수 있는지 직접 가늠 할 수 있는 실험법이라고 볼 수 있다.
Figure 1. The SMART mRNA amplification protocol.
Components & Storage Conditions
각 제품 구성물과 보관조건은 Certificate of Analysis 를 참조하십시오.
References
1. Chenchik, A. et al. (1998) Generation and use of high-quality cDNA from small amounts of total RNA by SMART PCR. In Gene Cloning and Analysis by RT-PCR (BioTechniques Books, MA), pp. 305-319.