내용
Refolding CA Kit (TaKaRa Code 7350 25 회)
8 M Guanidine hydrochloride 1 ml×2
4 M Dithiothreitol (DTT) 50 ㎕
1% Tween 40 1 ml×2
1% Tween 60 1 ml×2
1% CTAB 1 ml×2
1% SB3-14 1 ml×2
200 mM DL-Cysteine 0.75 ml×2
3% Cycloamylose (CA) 1.6 ml×7

Refolding CA Large Kit (TaKaRa Code 7351)
3% Cycloamylose (CA) 20 ml×6
8 M Guanidine hydrochloride 10 ml×2
보존 -20℃
제품설명
재조합 유전자를 대장균 등 미생물에서 발현시킨 경우 활성을 가진 가용성의 단백질만 생성되는 것이 아니라 세포 내에 불용화한 inclusion body가 축적되는 경우가 있다. 이 경우 단백질 활성 회복을 위하여 요소나 guanidine과 같은 변성제로 inclusion body를 unfolding 시킨 후 투석 또는 희석하여 변성제를 제거하고 refolding (재생) 시키는 방법이 일반적으로 이용되고 있다.
일반적인 방법으로 refolding시키는 것은 많은 시간과 노력이 소요되고 refolding 효율이 낮은 경우가 많다. 최근 refolding 조작을 2단계로 나누어 각 단계에 적합한 2종류의 화합물을 사용하여 refolding 효율을 높이는 방법이 보고되고 있다.
Refolding CA Kit는 2단계의 조작을 통하여 inclusion body를 형성한 재조합 단백질의 효율적인 refolding 조건을 검토하기 위한 키트이다. 4종류의 계면활성제와 고중합도 cycloamylose (이하 CA)의 조합에 의해 refolding 조건을 검토할 수 있다.
Refolding CA Large Kit는 Refolding CA Kit로 조건 검토를 한 후 scale up하여 refolding 조작하는 경우 등에 이용할 수 있다.
특징
본 키트의 CA는 cyclodextrin보다 우수한 refolding 능력을 나타낸다고 보고되어 있다. 본 제품은 25 시료의 refolding 조건을 검토할 수 있다. 또 계면활성제 및 CA는 50회의 동결 · 융해에도 안정하다 (단, CA 용액에 미생물 및 amylase가 혼입되면 환형이 깨져 refolding 능력이 저하되므로 주의한다). 또한 모든 조작이 1.5 ml의 튜브 안에서 이루어지므로 신속 간편하게 refolding 조건을 검토할 수 있다.
원리
계면활성제를 단백질의 변성용액 내에 첨가하여 변성제의 농도를 희석하고 단백질 분자간의 응집을 방지한다. 계속하여 CA를 첨가하고 그 folding 능력으로 단백질-계면활성제 복합체로부터 계면활성제를 제거하므로써 단백질 활성을 가진 고차구조로 refolding 시킨다.
License Notice : [L22, L23]