제품설명

고전압 pulse로 세포막에 일시적이면서 가역적으로 균열을 일으켜 DNA를 세포내로 이동시키는 electroporation법은 여러 가지 형질전환법 중 가장 효과적인 방법 중 하나이다. 종래의 Ca²⁺ 존재 하에서 조제한 competent cell에 비해 형질전환 효율과 결과의 재현성이 우수하여 실험시간을 절약할 뿐만 아니라 소량의 시료를 대장균에 도입할 때 특히 유용하다.
다카라에서는 독자적인 배양법으로 형질전환 효율이 보다 높은 4종류의 Electro-Cells E. coli HST08 Premium, JM109, DH5α, HB101를 제조, 판매하고 있다.

(주의) 본 제품은 Heat shock에 의한 형질전환에는 사용할 수 없다. 이 경우 E. coli Competent Cells (Code 9128외)의 제품을 사용한다.

균주 특징

고효율 α-상보성 선택 숙주 E. coli HST08 Premium Electro-Cells (Code 9028)
E. coli HST08 Premium는 외래의 메틸화된 DNA를 절단하는 유전자군 mrr, hsdRMS, mcrBC, mcrA이 결손되어 있다. 매우 높은 형질 전환 능력을 가지고 있기 때문에 메틸화된 DNA의 클로닝부터 유전자 라이브러리의 제작, 서브 클로닝 등에 이르기까지 폭넓은 용도에 사용할 수 있다. 큰 사이즈의 plasmid DNA의 형질 전환도 높은 효율로 가능하고, 같은 유전자형을 가지는 다른 competent cells보다 colony 형성 속도도 빠르기 때문에, TaKaRa DNA Ligation Kit LONG(Code 6024)과 같이 사용하면, 10 kb이상의 DNA의 클로닝, 라이브러리 제작등을 보다 쉽게 할 수 있다. pUC계 plasmid를 이용한 형질 전환 시에는, β-galatosidase의 α-상보성을 이용해, X-Gal 첨가에 의한 재조합체의 선별이 쉽다. F-이기 때문에, BAC, fosmid vetctor에도 사용 가능하다.

α- 상보성 선택 숙주 E. coli JM109 Electro-Cells (Code9022)
E. coli JM109는 pUC계 plasmid vector의 형질전환이나 M13 phage vector DNA의 형질도입 등을 하는 경우, vector로부터 발현하는 lacZ α peptide와 JM109F′가 코딩하는 lacZ△M15에 의한 β-galactosidase의 활성회복 (α-상보성)을 이용함으로써 재조합체의 선별이 간편한 균주이다. F′ plasmid를 갖고 있기 때문에 유전자 library 제작이나 subcloning 이외에 M13 vector DNA의 숙주로써 ssDNA의 제조에도 사용할 수 있다.

α- 상보성 선택 숙주 E. coli DH5α Electro-Cells (Code 9027)
pUC계 plasmid를 이용한 유전자 library 제작, 서브 클로닝 등을 하는 경우, 본 숙주균과 조합하면 β-galactosidase의 α-상보성을 이용하여 X-Gal에 의해 재조합체를 쉽게 선별할 수 있다. deoR 변이가 포함되어 있기 때문에 큰 크기의 Plasmid의 도입이 가능하다.

고효율 범용 숙주 E. coli HB101 Electro-cells (Code 9021)
E. coli HB101은 재조합 DNA 실험의 초기부터 널리 사용 되어온 균주로 유전형질이 안정적이고 사용이 용이하여 형질전환 실험 목적에 적당하다.

보존 -80℃

Genotype

Strain	Genotype
E. coli HST08 Premium	F-, endA1, supE44, thi-1, recA1, relA1, gyrA96, phoA, Φ80dlacZΔM15, Δ(lacZYA-argF)U169, Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC), ΔmcrA, λ-
E. coli JM109	recA1, endA1, gyrA96, thi-1, hsdR17 (rK-, mK-), e14- (mcrA-), supE44, relA1, Δ(lac-proAB)/F’ 〔traD36, proAB+, lacIq, lacZΔM15〕
E. coli DH5α	F-, Φ80dlacZΔM15, Δ(lacZYA-argF) U169, deoR, recA1, endA1, hsdR17 (rK-, mK+), phoA, supE44, λ-, thi-1, gyrA96, relA1
E. coli HB101	supE44, hsdS20(rB-, mB-), recA13, ara-14, proA2, lacY1, galK2, rpsL20, xyl-5, mtl-1, leuB6, thi-1

형질전환 효율

10 pg plasmid DNA를 50 ㎕의 세포에 transformation한 경우

HST08 Premium Competent Cells	>1 × 10⁹ cfu/㎍ pUC19
JM109 Competent Cells	>1 × 10⁹ cfu/㎍ pUC19
DH5α Competent Cells	>1 × 10⁹ cfu/㎍ pUC19
HB101 Competent Cells	>1 × 10⁸ cfu/㎍ pBR322

F’ plasmid의 안정성, α 상보성 확인

- E. coli JM109
pUC19을 이용해 형질전환을 한 후 100 ㎍/㎖ ampicillin, 0.3 mM IPTG, 60 ㎍/㎖ X-Gal을 포함한 LB-agar 배지에 도말한 경우 white colony는 10% 이하로 발생하였다.
- E. coli HST08 Premium, E.coli DH5α
pUC19을 이용해 형질전환을 한 후 100 ㎍/㎖ ampicillin, 60 ㎍/㎖ X-Gal을 포함한 LB-agar 배지에 도말한 경우 blue colony를 확인할 수 있다.

Cell 농도 > x 10¹⁰ bacteria/㎖

순도

50 ㎕의 E. coli Electro-Cells을 100 ㎍/㎖의 ampicillin이 포함된 LB-agar 배지에 접종한 경우 colony가 형성되지 않는다.