제품설명

Mandel과 Higa에 의해 확립된 E. coli의 형질전환법은 재조합 DNA 실험의 중요한 기초가 되었다. E. coli를 Ca²⁺ 이온 존재 하에 놓아두면 외래 DNA (plasmid, phage DNA 등)를 세포 안으로 도입할 수 있는 "competent"상태가 되고 이 세포를 competent cell이라 한다.
재조합 DNA 실험에서는 competent cell을 사용한 형질전환, 형질도입 등을 번번하게 실시하나, 효율이 높고 재현성이 좋은 competent cell을 제조하는 것은 쉽지 않다. 유전자 library 제작, 재조합 plasmid 제작이나 subcloning 등을 할 때, 유전자양이 적은 경우에는 도입 효율이 높은 competent cell을 사용하는 것이 중요하다.
다카라에서는 Hanahan의 방법을 개량한 새로운 방법으로 형질전환 효율이 높은 7종류의 E. coli Competent Cells HST08 Premium, JM109, DH5α, HB101, HST04 dam－/dcm－, MV1184, CJ236 (모두 EK1계의 숙주 E. coli)를 제조· 판매하고 있다.

균주 특징

고효율 α-상보성 선택 숙주 E. coli HST08 Premium Competent Cells (Code 9128)
E. coli HST08 Premium는 외래의 메틸화된 DNA를 절단하는 유전자군 mrr, hsdRMS, mcrBC, mcrA이 결손되어 있다. 매우 높은 형질 전환 능력을 가지고 있기 때문에 메틸화된 DNA의 cloning 부터 유전자 library의 제작, subcloning등에 이르기까지 폭넓은 용도에 사용할 수 있다. 큰 사이즈의 plasmid DNA의 형질 전환도 높은 효율로 가능하고, 같은 유전자형을 가지는 다른 competent cells보다 colony 형성 속도도 빠르기 때문에, TaKaRa DNA Ligation Kit LONG (Code 6024)과 같이 사용하면, 10 kb 이상의 DNA insert의 cloning, library 제작 등을 보다 쉽게 할 수 있다. pUC계 plasmid를 이용한 형질 전환 시에는, β-galatosidase의 α-상보성을 이용해, X-Gal 첨가에 의한 재조합체의 선별이 쉽고, F-이기 때문에, BAC, fosmid vetctor에도 사용 가능하다.

α- 상보성 선택 숙주 E. coli JM109 Competent Cells (Code 9052)
E. coli JM109는 pUC계 plasmid vector의 형질전환이나 M13 phage vector DNA의 형질도입 등을 하는 경우, vector로부터 발현하는 lacZ α peptide와 JM109F′가 코딩하는 lacZ△M15에 의한 β-galactosidase의 활성회복 (α-상보성)을 이용함으로써 재조합체의 선별이 간편한 균주이다. F′ plasmid를 갖고 있기 때문에 유전자 library 제작이나 subcloning 이외에 M13 vector DNA의 숙주로써 ssDNA의 제조에도 사용할 수 있다.

α- 상보성 선택 숙주 E. coli DH5α Competent Cells (Code 9057)
pUC계 plasmid를 이용한 유전자 library 제작, subcloning등을 하는 경우, 본 숙주균과 조합하면 β-galactosidase의 α-상보성을 이용하여 X-Gal에 의해 재조합체를 쉽게 선별할 수 있다. deoR 변이가 포함되어 있기 때문에 큰 크기의 Plasmid의 도입이 가능하다.

고효율 범용 숙주 E. coli HB101 Competent Cells (Code 9051)
E. coli HB101은 재조합 DNA 실험의 초기부터 널리 사용 되어온 균주로 유전형질이 안정적이고 사용이 용이하여 형질전환 실험 목적에 적당하다.

dam, dcm 결손 숙주 E. coli HST04 dam-/dcm- Competent Cells (Code 9129)
E. coli HST04 dam-/dcm-는 본래 E. coli가 가지고 있는 메틸화 유전자 dam, dcm이 결손되어 있어, DNA가 E. coli에 의해 메틸화되지 않는다. 본 제품으로 조제된 plasmid는 dam 또는 dcm methylase의 영향을 받는 제한효소로 절단 가능하다. dam, recA이 같이 결손 되는 경우 세포가 사멸하기 때문에 이 세포는 recA 유전자를 발현하고 있다. 반복서열을 갖고 있는 외래 DNA는 recA 유전자에 의해 재조합이 일어날 가능성이 있으므로 cloning용 숙주로는 적합하지 않으며, 형질전환시에는 미리 구축된 plasmid를 추천한다.

Amber 변이 선택용 한가닥 ssDNA 제조용 숙주 E. coli MV1184 Competent Cells (Code 9055)
E. coli MV1184는 amber suppressor free 균주로 amber 변이 DNA의 선별에 이용할 수 있다. 또한 F’ plasmid를 가지기 때문에 M13 phage vector나 phagemid vector의 숙주로 ssDNA의 조제에도 이용할 수 있다.

부위 특이적 변이 처리용 ssDNA 제조 숙주 E. coli CJ236 Competent Cells (Code 9053)
E. coli CJ236은 dut, ung 변이주를 가진 E. coli에서 dUTPase (Dut)와 Uracil-DNA glycosylase (Ung)가 결손되어 있어 DNA 중 Thymine (T)의 일부가 deoxyuracil (dU)로 치환된 DNA를 합성한다. Kunkel법은 이러한 E. coli를 이용하여 site-directed mutagenesis를 실시하는 방법으로, 변이 시키고자 하는 유전자를 pUC118/119, M13 phage 등의 ssDNA를 조제할 수 있는 vector에 cloning하여 CJ236을 숙주로 ssDNA를 조제하면 Kunkel법으로 사용할 수 있는 deoxyuracil 함유 DNA를 얻을 수 있다. F′ plasmid (pCJ105)에 chloramphenicol 내성 유전자를 갖고 있기 때문에 chloramphenicol 존재 하에서의 배양이 필요하다.

보존 -80℃

Genotype

Strain	Genotype
E. coli HST08 Premium	F^-, endA1, supE44, thi-1, recA1, relA1, gyrA96, phoA, Φ80dlacZΔM15, Δ(lacZYA-argF)U169, Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC), ΔmcrA, λ^-
E. coli JM109	recA1, endA1, gyrA96, thi-1, hsdR17 (rK-, mK-), e14- (mcrA-), supE44, relA1, Δ(lac-proAB)/F’ 〔traD36, proAB+, lacIq, lacZΔM15〕
E. coli DH5α	F^-, Φ80dlacZΔM15, Δ(lacZYA-argF) U169, deoR, recA1, endA1, hsdR17 (rK^-, mK⁺), phoA, supE44, λ^-, thi-1, gyrA96, relA1
E. coli HB101	supE44, hsdS20(rB-, mB-), recA13, ara-14, proA2, lacY1, galK2, rpsL20, xyl-5, mtl-1, leuB6, thi-1
E. coli HST04 dam^-/dcm^-	F^-, ara, Δ(lac-proAB)[Φ80dlacZΔM15], rpsL (str), thi, Δ(mrr-hsdRMSmcrBC), ΔmcrA, dam, dcm
E. coli MV1184	ara, Δ(lac-proAB), rpsL, thi (Φ80 lacZΔM15), Δ(srl-recA)306:Tn10 (tetr)/F’〔traD36, proAB⁺, lac Iq, lacZΔM15〕
E. coli CJ236	dut1, ung1, thi-1, relA1/pCJ105 (F’ camr)

형질전환 효율

1 ng plasmid DNA를 100 ㎕의 세포에 transformation한 경우

HST08 Premium Competent Cells	>1 × 10⁸ cfu/㎍ pUC19
JM109 Competent Cells	>1 × 10⁸ cfu/㎍ pBR322
DH5α Competent Cells	>1 × 10⁸ cfu/㎍ pUC19
HB101 Competent Cells	>1 × 10⁸ cfu/㎍ pBR322
HST04 dam^-/dcm^- Competent Cells	>1 × 10⁶ cfu/㎍ pUC19
MV1184 Competent Cells	>1 × 10⁷ cfu/㎍ pUC119
CJ236 Competent Cells	>1 × 10⁷ cfu/㎍ pUC119

F’-plasmid의 안정성, α 상보성 확인

- E. coli JM109, E.coli MV1184
pUC19을 이용해 형질전환을 한 후 100 ㎍/㎖ ampicillin, 0.3 mM IPTG, 60 ㎍/㎖ X-Gal을 포함한 LB-agar 배지에 도말한 경우 white colony는 10% 이하로 발생하였다.
- E. coli HST08 Premium, E.coli DH5α
pUC19을 이용해 형질전환을 한 후 100 ㎍/㎖ ampicillin, 60 ㎍/㎖ X-Gal을 포함한 LB-agar 배지에 도말한 경우 blue colony를 확인할 수 있다.
- E. coli CJ236
30 ㎍/㎖의 chloramphenicol을 포함한 배지에서 F’-plasmid (pCJ105)가 형질전환 되지 않은 E. coli는 생존할 수 없음을 확인하였다.

Cell 농도 1~2 x 10⁹ bacteria/㎖

Plasmid 스크리닝에 사용되는 항생제와 농도 (㎍/㎖)

Code	제품명	Ampicillin	Kanamycin	Chloram-phenicol	Strepto-mycin	Tetracycline
9021	E. coli HB101 Electro-Cells	100	50	20	NA	20
9022	E. coli JM109 Electro-Cells	100	50	20	50	20
9027	E. coli DH5α Electro-Cells	100	50	20	50	20
9028	E. coli HST08 Premium Electro-Cells	100	50	20	50	20
9051	E. coli HB101 Competent Cells	100	50	20	NA	20
9052	E. coli JM109 Competent Cells	100	50	20	50	20
9053	E. coli CJ236 Competent Cells	100	50	NA	50	20
9055	E. coli MV1184 Competent Cells	100	50	20	NA	NA
9057	E. coli DH5α Competent Cells	100	50	20	50	20
9128	E. coli HST08 Premium Competent Cells	100	50	20	50	20
9129	E. coli HST04 dam－/ dcm－ Competent Cells	100	50	20	NA	20