내용 (25㎕ 반응, 50 회）
TaKaRa Ex Taq HS 5 U/㎕ 12.5㎕
Tli RNase H II*1 200 U/㎕ 25㎕
5×Reaction Mixture*2 5×conc. 250㎕
VT Primer Mix*3 5 ㎛ each 100㎕
VT Probe Mix (FAM ROX)*4 5×conc. 250㎕
VT1 Positive Control 1×104 copies/㎕ 10㎕ (10회분)
VT2 Positive Control 1×104 copies/㎕ 10㎕ (10회분)
dH2O 1 ㎖
*1 Tli RNase H II는 Thermococcus litoralis 유래의 내열성 RNase H이다.
*2 dNTP Mixture, Internal Control을 포함한다.
*3 프라이머는 주식회사 Shimazu에서 제조한 것이다.
*4 형광 표지 probe는 차광에 유의하세요.
보존 -20℃
제품설명
본 키트는 O157 : H7를 비롯장관출혈성대장균 (EHEC)에 의한 식중독 원인 유 전자인 Verotoxin 유전자 (VT1, VT2 gene)를 Real time PCR 장치를 이용해 검 출하기 위한 키트이다.
본 키트의 증폭에는 Hot Start PCR용 효소인 TaKaRa Ex Taq HS를 사용하므 로 반응액 조제시 cycle 전의 mis-priming과 프라이머 dimer에서 유래한 비특이 적 증폭을 막을 수 있고 고감도의 검출이 가능하다.

증폭 산물의 실시간 검출에는 Cycling Probe Technology*를 채용했다. Cycling Probe Technology는 RNA와 DNA로 이루어진 Chimera probe와 RNase H의 조합에 의한 고감도 검출방법으로 증폭 중에 또는 증폭 후의 유전자 단편의 특 정 서열을 효율적으로 검출할 수 있다. Probe는 다른 한쪽 끝이 형광 물질이고, 또 다른 한쪽 끝은 그 형광 물질이 발산하는 형광을 소광(消光)하는 물질 (Quencher)로 표지되어 있다. 이 probe는 intact 상태에서는 quenching에 의해 강한 형광을 발산하지 않지만 서열이 상호 보완적인 증폭 산물과 합쳐져서 형성 된 뒤 RNase H에 의해 RNA 부분에서 절단되어 강한 형광을 발산하게 된다. 이 형광 강도를 측정함으로써 증폭 산물량을 모니터할 수 있다.

본 키트에는 VT1 gene 및 VT2 gene을 검출하기 위한 FAM 표지 probe, internal control과 internal control 검출용 ROX 표지 probe가 포함되어 있다. 2 파장을 동시에 모니터링하여 한 개의 tube로 VT1 gene 및 VT2 gene의 검출과 internal control 검출에 의한 위음성(Pseudopositive) 모니터가 가능하다. 실시 간으로 검출하므로 전기영동이 필요 없고 신속한 판정 결과를 얻을 수 있다. 아울러, 본 키트로는 VT1 gene과 VT2 gene의 식별은 불가능하다.

* ID Biomedical사에서 Cycling Probe Technology 및 DNA-RNA-DNA chimera형 핵산 기술을 독점 계약하여 다카라바이오에서 제조합니다.
키트 이외에 필요한 시약 및 기기
【시약】
  TaKaRa DEXPAT (TaKaRa Code 9091)
【기기】*
  실시간 PCR용 증폭장치 및 전용 tube · 전용 plate
  Thermal Cycler Dice Real Time System (TaKaRa Code TP800),
  ABI 7500 Real-Time PCR System (Applied Bio systems) 등
  heat block (95℃까지 온도를 올릴 수 있는 것)
【기타】
  200㎕, 20㎕, 10㎕ 각 micro pipette, micro pipette tip(소수성 필터 첨부)
- Smart CyclerⅡ System을 사용할 경우에는 Cycleave PCR O-157(VT1/VT2) Detection 키트 Ver.2.0 (TaKaRa Code CY203)을 권장합니다.
License Notice : [A1, L4, L8, L15]