제품설명
SapphireAmp® Fast PCR Master Mix (2×Premix)은 신장 시간 10초/kb의 고속반응이 가능한 dye plus premix이다.
고속 PCR에 필요한 component (최적화된 buffer, PCR효소, dNTP Mixture 등)와 전기영동시에 편리한 색소 마커 (파랑) 및 비중제를 포함하는 2 x Hot Start PCR premix 이다.
Primer와 template DNA를 첨가하는 것으로 간단히 고속 PCR을 수행할 수 있고, 반응 후에는 반응액을 직접 전기영동할 수 있에 작업 효율을 향상할 수 있다.
본 제품을 이용하면 단시간에 대장균의 colony PCR에 의한 insert 확인 (~5 kb전후 증폭에 추천)을 진행할 수 있다 (5 kb 증폭 소요시간; 약 1시간 15분). 또한 human genomic DNA를 주형으로 한 PCR에서 6 kb의 증폭을 확인하고 있다.
내용(160회, 50 ㎕ PCR 반응시)

1.

SapphireAmp Fast PCR Master Mix (2×Premix)

1 ㎖×4

2.

dH2O

1 ㎖×4

보존 -20℃
증폭 산물의 말단
SapphireAmp® Fast PCR Master Mix를 이용해 증폭한 PCR 산물의 대부분은 3＇말단에 A가 1 염기 부가되어 있다. 따라서 PCR 산물을 직접 T-Vector (pMD20 (Code 3270), pMD19 (Simple) (Code 3271) 등) 또는 Mighty TA-cloning Kit (Code 6028)을 이용하여 cloning할 수 있다.
또, Mighty Cloning Reagent Set (Blunt End) (Code 6027)로 평활 말단화 및 인산화를 처리를 하여, 평활 말단 vector에도 cloning할 수 있다.
실험 예 - 다양한 insert 확인을 위한 colony PCR
E. coli에 형질전환한 마우스 cDNA유래의 pUC118 library (0.5 kb ~ 5 kb의 insert 삽입)를 colony PCR하여, 다양한 크기의 증폭산물 (0.5 kb ~ 5 kb)를 확인할 수 있었다.


샘플: E. coli colony를 tip으로 긁어 PCR 반응액에 현탁한 후 PCR 증폭
PCR 조건
  94 ℃ 1 min.
  ↓
  98 ℃ 5 sec.
  55 ℃ 5 sec.      30 cycles
  72 ℃ 40 sec.
PCR 소요 시간: 1시간 11분 (TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice® 사용)
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