- 높은 유도발현율과 극도로 낮은 basal expression
- cDNA와 miRNA의 고감도 발현 조절
- Plasmid, lentivirus, retroivirus 형태로 다양하게 이용 가능
Tet-On Advanced와 Tet-Off Advanced Inducible Gene Expression System은 E. coli 의 조절 기작인 tetracycline-resistance operon에 기반을 두고 있으며, 각 system은 포유류 세포에 적용할 수 있도록 최적화된 2 개의 구성요소로 되어 있다 (Figure 1):
- Regulator vector는 tetracycline으로 조절되는 Tet-On Advanced 또는 Tet-Off Advanced transactivator를 발현하는 vector이다. 이 transactivator는 조절 인자인 doxycycline (Dox ; tetracycline 유도체)에 대하여 반대로 반응하며, 3 개의 minimal VP16 transcription activation domain을 연결하여 재조합한 bacterial Tet Repressor (TetR)로 구성이 되어 있다 (1).
- Response vector인 pTRE-Tight는 목적 유전자의 발현을 조절하는 promoter에 기능이 향상된 tetracycline response element (TRE)를 가지고 있다.
이 시스템으로 구축된 cell line에서는 목적 유전자의 발현 정도를 Dox의 첨가량에 따라 정확하게 조절할 수 있다 (Figure 2). Tet-Advanced System의 최대 발현 수준은 아주 높고 특이적일 뿐 아니라 Dox 이외의 세포 내 인자에 의하여 영향을 받지 않는다. Clontech에서는 미리 제작된 Tet-Advanced Cell Line을 판매하고 있다.
- Tet-On Advanced transactivator는 Dox의 존재 하에서 TRE promoter에 결합하여 유전자 발현을 활성화시킨다.
- Tet-Off Advanced transactivator는 Dox가 없을 경우 TRE promoter에 결합하여 유전자 발현을 활성화시킨다.
Clontech은 2 종류의 아주 효율적인 virus 도입용 Tet-advanced system인 Retro-X Tet-Advanced Inducible Expression System과 Lenti-X Tet-Advanced Inducible Expression System의 을 판매하고 있으며 대부분의 세포에 적용이 가능하다. 특히, Lenti-X lentivirus system은 primary culture, 줄기세포, 신경세포, 비분열세포에 유전자를 도입할 경우 매우 유용하며, 높은 역가 (titer)를 보장하는 Lenti-X HT Packaging System을 포함하고 있다.
Figure 1. Induced expression in the Tet-Off Advanced and Tet-On Advanced Systems. The Tet-controlled transactivators are fusion proteins that contain a TetR-derived DNA-binding domain joined to three minimal transcription activation domains from HSV VP16. Each transactivator has been optimized for expression in mammalian cells.
Figure 2. Induced luciferase expression in Tet-On Advanced and Tet-Off Advanced Expression Systems. In the absence of Dox, basal expression is undetectable in Tet-On Advanced cells, whereas full induction in the presence of Dox is very high. Tet-Off Advanced cells show extremely high induction in the absence of Dox, and undetectable basal expression in its presence.
Components & Storage Conditions
각 제품 구성물과 보관조건은 Certificate of Analysis 를 참조하십시오.
References
1. Urlinger, S. et al. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97(14):7963-7968.