Genome Editing으로 생성된 Monoallelic, biallelic indel 동정
재조합 Cas9 nuclease와 sgRNA로 in vitro cleavage를 이용하여 쉽게 Genotyping
target genomic DNA를 세포로부터 direct PCR하여 Genotyping 가능

제품설명

CRISPR/Cas9 genome editing (크리스퍼 게놈편집)은 타겟 유전자에 하나의 allele (monoallelic) 또는 두개의 allele (biallelic) 변이를 생성하는 것으로 알려져 있다. Guide-it Genotype Confirmation Kit (Code 632611)는 Genome Editing 후의 세포 클론에서 변이 유전자를 간편하게 Genotyping할 수 있는 제품으로, 한쪽 allele 변이 (monoallelic), 대립 allele 변이 (biallelic)를 구분할 수 있을 뿐만 아니라, Wild type (unchanged) 클론까지 구분할 수 있다.
Cas9과 single guide RNA (sgRNA)를 처리하여 게놈편집을 시행한 세포에서 타겟유전자를 direct PCR하여 증폭된 증폭산물 (amplicon)을 tube 내에서 재조합 Cas9과 sgRNA를 처리하여 in vitro cleavage를 수행한다. 그 후, 절단산물을 Agarose gel 전기영동을 시행함으로써 genotype을 판정할 수 있다.

* 본 제품에는 sgRNA를 합성하는 시약이 포함되어있지 않습니다. In vitro sgRNA 합성은 Guide-it™ sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code 632635)을 이용하십시오.

그림 1. Guide-it Genotype Confirmation Kit의 원리 및 Workflow.

그림 2. in vitro Cas9/sgRNA 절단에 의한 Genotype 판정

그림 3. (그림 A) Genome Editing을 수행한 세포 (HEK293 Cells)의 Genotyping 결과 (그림 B) 그림 A로부터 획득, 선택한 클론의 시퀀싱 분석 결과

적용

CRISPR/Cas9 gene editing
Identification of monoallelic and biallelic mutations after CRISPR/Cas9 gene editing

구성품 (자세한 내용은 CoA를 참조하세요)

Extraction Buffer 1
Extraction Buffer 2
Guide-it Recombinant Cas9 Nuclease(500 ng/μ l)
15X Cas9 Reaction Buffer
Terra PCR Direct Polymerase Mix(1.25 U/μ l)
2X Terra PCR Direct Buffer (with Mg²⁺, dNTP)
RNase-Free Water
15X BSA
Monoallelic Mutant Control Fragment(20 ng/μ l)
Biallelic Mutant Control Fragment(20 ng/μ l)
Control Fragment(20 ng/μ l)
Control sgRNA(50 ng/μ l)

보존

-20℃