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게놈편집 후의 Monoallelic, biallelic indel 판정에

Genotype Confirmation Kit

제조사	제품코드	제품명	용량	가격 (부가세별도)	비고	사용자매뉴얼
Clontech	632611	Guide-it™ Genotype Confirmation Kit	100 rxns	985,000원		, ,

Product index

Overivew
유전자 편집 전 단계
편집 유전자 도입
유전자 편집 후 확인
CRE recombinase
- CRE Recombinase Gesicl..
- AAV Helper Free System..

Genome Editing으로 생성된 Monoallelic, biallelic indel 동정
재조합 Cas9 nuclease와 sgRNA로 in vitro cleavage를 이용하여 쉽게 Genotyping
target genomic DNA를 세포로부터 direct PCR하여 Genotyping 가능

제품설명

CRISPR/Cas9 genome editing (크리스퍼 게놈편집)은 타겟 유전자에 하나의 allele (monoallelic) 또는 두개의 allele (biallelic) 변이를 생성하는 것으로 알려져 있다. Guide-it Genotype Confirmation Kit (Code 632611)는 Genome Editing 후의 세포 클론에서 변이 유전자를 간편하게 Genotyping할 수 있는 제품으로, 한쪽 allele 변이 (monoallelic), 대립 allele 변이 (biallelic)를 구분할 수 있을 뿐만 아니라, Wild type (unchanged) 클론까지 구분할 수 있다.
Cas9과 single guide RNA (sgRNA)를 처리하여 게놈편집을 시행한 세포에서 타겟유전자를 direct PCR하여 증폭된 증폭산물 (amplicon)을 tube 내에서 재조합 Cas9과 sgRNA를 처리하여 in vitro cleavage를 수행한다. 그 후, 절단산물을 Agarose gel 전기영동을 시행함으로써 genotype을 판정할 수 있다.

* 본 제품에는 sgRNA를 합성하는 시약이 포함되어있지 않습니다. In vitro sgRNA 합성은 Guide-it™ sgRNA In Vitro Transcription Kit (Code 632635)을 이용하십시오.

그림 1. Guide-it Genotype Confirmation Kit의 원리 및 Workflow.

그림 2. in vitro Cas9/sgRNA 절단에 의한 Genotype 판정

그림 3. (그림 A) Genome Editing을 수행한 세포 (HEK293 Cells)의 Genotyping 결과 (그림 B) 그림 A로부터 획득, 선택한 클론의 시퀀싱 분석 결과

적용

CRISPR/Cas9 gene editing
Identification of monoallelic and biallelic mutations after CRISPR/Cas9 gene editing

구성품 (자세한 내용은 CoA를 참조하세요)

Extraction Buffer 1
Extraction Buffer 2
Guide-it Recombinant Cas9 Nuclease(500 ng/μ l)
15X Cas9 Reaction Buffer
Terra PCR Direct Polymerase Mix(1.25 U/μ l)
2X Terra PCR Direct Buffer (with Mg²⁺, dNTP)
RNase-Free Water
15X BSA
Monoallelic Mutant Control Fragment(20 ng/μ l)
Biallelic Mutant Control Fragment(20 ng/μ l)
Control Fragment(20 ng/μ l)
Control sgRNA(50 ng/μ l)

보존

-20℃

Keyword : Mutation 확인,genotyping,allele,monoalleic,bialleic,indel,NHEJ,KO,Knock out,Knockout,Knock-out,CRISPR,CRISPR/Cas9,Cas9,sgRNA,크리스퍼,gene editing,유전자편집

유전자 편집 후 확인

Genome editing 이후 mutation 확인용

Mutation Detection Kit

약 4시간만에 간단하고 정밀하게 생성된 변이 ..

염기치환, 삽입 변이 검출

게놈편집 후의 Monoallelic, biallelic indel ..

Genotype Confirmation Kit

Indel (mutation) 서열 확인

Indel Identification Kit