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Premix Type의 High Fidelity PCR 효소

HS (Premix)

제조사	제품코드	제품명	용량	가격 (부가세별도)	비고	사용자매뉴얼
Takara	R040A	PrimeSTAR® HS (Premix)	100 회 (50 μl 반응 시)	160,000원 ~~200,000원~~	02.26 ~ 04.19	,
Takara	R040B	PrimeSTAR® HS (Premix)	400 회 (R040A x 4)	640,000원		,

Product index

Overview
High fidelity PCR: PrimeST..
Standard PCR: Ex, LA, rTaq..
Direct PCR: MightyAmp
Dye가 포함된 premix
특수 PCR (Epigenetics, UNG..
PCR Enzyme (Clontech)
DNA PCR 관련 제품
RT-PCR 관련 제품
Mutagenesis
- Diversify PCR Random M..
PCR Subtraction 관련 제품
PCR 장치
PCR Accessory Products
- Advantage Ultrapure PC..
- TaqStart Antibody
Whole Genome SNP Detection
- TITANIUM DNA AMPLIFICA..

제품설명

본 제품은 다카라가 독자적으로 개발한 High-Fidelity PCR 효소인 PrimeSTAR HS DNA Polymerase와 반응용 buffer, dNTP Mixture를 2 배 농도로 혼합한 Premix PCR 효소이다. 반응액 조제가 간편하고 contamination 위험도 낮으므로 high throughput 실험계에 유용하다.
본 제품에 사용되고 있는 PrimeSTAR HS DNA Polymerase는 매우 강력한 3' → 5' exonuclease 활성을 가져, PCR 증폭에 대해 강력한 Proofreading 기능을 나타내는 한편, Taq DNA Polymerase의 매우 뛰어난 증폭 효율도 나타낸다.
상온에서의 DNA Polymerase 활성 및 3' → 5' exonuclease 활성을 억제하는 monoclonal Ab를 첨가하고 있기 때문에, PCR 반응전의 miss-priming이나 primer의 digestion을 막을 수 있다. 또한 본 효소는 높은 priming 효율을 가지고 있기 때문에, annealing 시간을 짧게 설정할 수 있어 종래의 반응 시간을 단축할 수 있다. 게다가 고도로 지적화한 PrimeSTAR Buffer를 이용하는 것으로, 폭넓은 타겟에 대해 High Fidelity, 고감도, 고특이성, 높은 성공율로 증폭이 되었다.

내용물(100회 반응분)

PrimeSTAR HS (Premix ) : 500 μl×5

조성 :
PrimeSTAR HS DNA Polymerase	1.25 U/25 μl
dNTP Mixture	2 ×conc.；각 0.4 mM
PrimeSTAR Buffer	2 ×conc.；Mg²⁺ = 2 mM

보존 -20℃

※ 동결 융해의 반복에 의해 활성이 현저하게 떨어질 수 있다. 융해 후에는 PCR용 tube에 분주하여－20 ℃ 보존해 주시기 바랍니다(50 μl 반응의 경우, 25 μl 두개로).

일반적인 PCR 반응 조성(Total 50 μl)

	사용량	최종 농도
PrimeSTAR HS (Premix)	25 μl	1 ×
Primer 1	10 ~15 pmol	0.2 ~0.3 μM
Primer 2	10 ~15 pmol	0.2 ~0.3 μM
Template	<200 ng
dH₂O	up to 50 μl

PCR 조건

(A ) 3 step PCR 의 경우

98 ℃	10 sec.	┓
55 ℃	5 sec. 또는 15 sec.	┃ 30 cycles
72 ℃	1 min. /kb	┛

(B ) 2 step PCR 의 경우

98 ℃	10 sec.	] 30 cycles
68 ℃	1 min. /kb	] 30 cycles

본 효소의 경우 일반적으로 3 step PCR 반응을 권장합니다.

- Denature 조건 98 ℃
    5 ~10 sec.를 권장한다. 94 ℃는 10~15 sec.로 설정하시기 바랍니다.
- Annealing 온도
    우선 55 ℃에서 test 해보시기 바랍니다.
- Annealing 시간
    Tm 값(아래 참고)이 55 ℃ 이상의 경우 → 5 sec.로 설정
    Tm 값(아래 참고)이 55 ℃ 미만의 경우 → 15 sec.로 설정

※ Tm 값 계산방법
Tm 값(℃)=2 (NA＋NT)＋4 (NC＋NG)－5
Primer의 길이가 25 mer 이하의 경우에 적용하시기 바랍니다. 25 mer가 넘는 경우는 annealing 시간을 5 sec.로 설정.

<중요> 본 효소는 priming 효율이 매우 높은 효소이므로, annealing 시간은5 sec. 또는 15 sec.로 설정하고 반응하시기 바랍니다. Annealing 시간이 길어지면 smearing 현상이 생기는 경우가 있습니다.

3 step에서 smearing 현상이 발생하는 경우, 또는 Tm 값이 70 ℃ 이상인 primer를 사용하는 경우에는 2 step의 반응을 권장합니다.

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Keyword :

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