Bacterial Expression & Purification Starter Kit는 cloning 형태를 선택할 수 있도록 제공되며 N-말단이나 C-말단 6 x HN fusion tag을 encoding하는 pET 기반 vector (1)를 사용하여 histidine 표지 단백질을 고발현시킬 수 있다.
목적 유전자는 pEcoli expression vector로 cloning하여 N-말단이나 C-말단에 6 x HN tag된 구조를 만들수 있다.
Cloning 방법 선택
EP (Express & Purify) Starter Kit는 제한효소를 사용하는 일반적인 cloning용 circular vector를 포함하는 pEcoli Expression System으로 구성되어 있다. Vector에는 MSC site가 있어 원하는 서열에 맞춰 cloning할 수 있다.
CEP (Clone, Express & Purify) Starter Kit는 cloning을 위해 linearized vector와 In-Fusion 효소를 제공하는 pEcoli Expression System을 포함한다. 이 시스템은 Clontech의 In-Fusion cloning 기술을 사용하여 쉽고, 확실하게 PCR directional cloning을 진행할 수 있다 (2). 생물학적 활성을 유지시키기 위해 목적 유전자에 염기를 추가하지 않아도 되는 큰 장점이 있다.
정제 resin 선택
E. coli 에 형질전환과 선별과정 후, 발현된 N-말단이나 C-말단 표지 단백질은 immobilized metal affinity chromatography (IMAC) resin과 buffer를 선택하여 효과적으로 정제한다. 가장 좋은 결합력을 위해 His60 Ni Superflow Resin이나 가장 좋은 정제 순도를 위해선 HisTALON Resin을 선택할 수 있다. 모든 EP와 CEP Starter Kit는 단백질 추출과 정제를 위해 필요한 buffer나 resin의 종류, resin의 형태에 따라 제품을 선택할 수 있다.
Figure 1. Excellent purity is obtained when using HisTALON Cartridges for purification. The CEP Starter Kit was used to generate BL21 E. coli expressing N-terminal 6xHN-tagged AcGFP1, as seen in Panels A & B; and C-terminal 6xHN-tagged AcGFP1, as seen in Panels C & D.
Figure 2. Use His60 Ni Superflow for the highest binding capacity.The CEP His60 Ni Superflow Starter Kit was used to generate and purify 6xHNAcGFP1. Lane M: Molecular weight marker. Lane OS: Clarified lysate with expressed 6xHN-AcGFP1. Lane FT: Nonadsorbed material. Lanes W1 and W2: Wash. Lane E1-E4: Eluted 6xHN-AcGFP1 fractions.
Components & Storage Conditions
각 제품 구성물과 보관조건은 Certificate of Analysis 를 참조하십시오.
References
1. Moffatt, B.A. and Studier, F.W. (1986) J. Mol.Biol. 189(1):113-130.
2. In-Fusion PCR Universal Cloning Kits (2005) Clontechniques XX(2):16-17.
대체품 안내

종매품

대체품

EP His60 Ni Gravity Column Starter Kit (Code 631416)

pET Express & Purify Kit-HisTALON (Code 631430)

EP HisTALON Gravity Column Starter Kit (Code 631319)

pET Express & Purify Kit-His60(Code 631431)

CEP HisTALON Gravity Column Starter Kit (Code 631423)

pET Express & Purify Kit-His60 (In-Fusion Ready) (Code 631428)

CEP His60 Ni Gravity Column Starter Kit (Code 631422)

pET Express & Purify Kit-HisTALON (In-Fusion Ready)(Code 631429)