Dr. GenTLE™ Precipitation Carrier는 DNA 또는 RNA의 에탄올 침전 시 사용하는 co-precipitant 이다. 일반적으로 공침제로 사용되는 glycogen 보다 낮은 농도에서도 높은 효율로 핵산을 회수할 수 있으며 5 pg/㎕의 저농도 샘플에서도 적용이 가능하다. 또한 에탄올 침전 시 저온에서 보관할 필요 없어 에탄올 첨가 후 바로 침전이 가능하다.
이 제품을 사용하면 에탄올 침전 시 백색의 침전물이 생겨 쉽게 눈으로 확인이 가능하고, 미량의 샘플 역시 확인이 가능해 wash 과정에서 샘플의 손실 없이 안전하게 실험을 진행할 수 있다. 또한 각종 효소 반응을 저해하지 않아 회수한 핵산을 PCR, 제한효소 처리, 역전사, cloning, sequencing, E.coli transformation, fluorescent sequencing등에 분자생물학 실험에 사용할 수 있다.
내용
Precipitation Carrier
800 ㎕
3 M Sodium Acetate (pH5.2)
2 x 1 ㎖
보존 실온
용도
- 핵산 (DNA 또는 RNA)의 에탄올 침전 시 co-precipitant로 사용
사용 방법
1. 핵산 (DNA 또는 RNA) 용액*1에 1/10의 3 M Sodium Acetate (pH5.2) 첨가 후 교반
2. 4 ㎕의 Precipitation Carrier 첨가 후 교반*2
3. 2.5배의 에탄올 첨가 후 교반
4. 4℃에서 12,000 rpm으로 15분간 원심분리
5. 백색 침전물을 남기고 상등액 제거
6. 70% 에탄올 첨가
7. 4℃에서 12,000 rpm으로 5분간 원심분리
8. 백색 침전물을 남기고 상등액 제거
9. 적당량의 멸균 증류수 또는 TE버퍼에 용해 *1 5 pg/㎕에서 100 ng/㎕의 범위의 핵산 용액에 적용 가능하다. *2 400 ㎕ 이하의 핵산 용액에 Precipitation Carrier 4 ㎕사용, 400 ㎕ 이상인 경우 핵산 용액 100 ㎕ 당 1 ㎕ 사용한다
사용상의 주의
1. Dr. GenTLE™ Precipitation Carrier를 사용하면 별도의 냉각이 필요 없다. 냉각하는 경우 오히려 회수율이 감소하는 경우가 있기에 바로 원심분리한다.
2. 한번 이 제품으로 회수한 핵산 용액을 다시 한번 에탄올 침전을 진행하는 경우, 다시 이 제품을 추가하는 것은 권장하지 않는다. 이 경우 용액의 점성이 더 높아져 핵산의 용해가 어렵게 되는 경우가 있다.
3. 핵산의 농도가 높을 경우 (0.3 ㎍/㎕ 이상) 이 제품을 사용하면 오히려 회수율이 감소할 수 있어 권장하지 않는다.
4. 핵산의 농도가 10 pg/㎕ 이하인 경우에는 회수율이 저하되는 경우가 있다.
5. Isopropanol을 사용한 침전에서도 사용이 가능하지만 에탄올 침전과 비교해서 침전물이 약간 더 투명한 경향이 있으므로, 주의가 필요하다.
