*업그레이드 제품 출시! 최고 수준의 정확성은 유지, 고속 PCR 성능 대폭 향상 - PrimeSTAR^® Max DNA Polymerase Ver.2

제품설명

PrimeSTAR Max DNA Polymerase는 최고 속도의 신장성(5초/kb)과 PrimeSTAR HS DNA Polymerase가 원래 가지고 있는 매우 높은 정확성, 고감도, 고특이성 및 확실성을 겸비한 최고 수준의 PCR 증폭 시스템이다. 효소 자체가 가지고 있는 높은 priming 효율과 독자적인 신장인자(elongation factor)를 첨가하여, annealing 시간과 신장(extension)시간을 큰 폭으로 단축하여, 고속 PCR 반응이 가능하도록 하였다. 또, 지금까지 PCR 반응의 저해요소로 작용했던 다량의 핵산(template DNA)을 포함한 반응도 신장(extension)시간을 표준반응시간(1min/kb)으로 설정하면 증폭이 가능하여, RT-PCR 등에도 사용하기 쉬운 효소이다. 본 효소는 상온에서 DNA Polymerase 활성 및 3＇→5＇exonuclease 활성을 억제하는 단일 클론 항체를 이용한 hot start 효소이며, 반응에 필요한 구성물(buffer, dNTP)을 미리 섞어 놓은 master mix로, 상온에서 빠르고 편리하게 반응액 조제가 가능하다.

내용

PrimeSTAR Max Premix (2×)	625 μl × 4
※ dNTP Mixture(각 0.4 mM；2×), Mg²⁺(2 mM；2×)를 포함한다.

보존

-20℃
동결 융해를 반복하면 활성이 저하될 가능성이 있으므로 주의해 주십시요.

일반적인 PCR 반응액조성 (Total 50 μl)

※ PCR 반응액의 조제는 실온에서도 가능하지만, 효소 등 각 시약은 얼음에 꽂아두고 사용.

	사용량	최종농도
PrimeSTAR Max Premix(2×)	25 μl	1×
Primer1	10~15 pmol	0.2~0.3 μM
Primer2	10~15 pmol	0.2~0.3 μM
Template	＜200 ng*
멸균증류수	up to 50 μl

고속 PCR로 증폭할 수 있는 최적 주형량(50 μl 반응시)；

Human genomic DNA：5~200 ng
대장균 Genomic DNA ：100 pg~200 ng
λDNA：10 pg~10 ng
Plasmid DNA：10 pg~1 ng

PCR 조건

※ PrimeSTAR Max DNA Polymerase를 이용한 고속 증폭 시스템에서는 신장 인자(elongation factor)의 효과를 최대한으로 발휘하기 위해서 3 step 반응을 추천 한다.

1. Template DNA 양이 200 ng / 50㎕ 반응 이하인 경우*

98℃	10 sec	30 - 35 cycles
55℃	5 sec or 15 sec
72℃	5 sec/kb

2. Template DNA 양이 200 ng / 50㎕ 반응을 넘는 경우*

98℃	10 sec	30 - 35 cycles (3-step PCR)
55℃	5 sec or 15 sec
72℃	30~60 sec/kb

또는

98℃	10 sec	30 - 35 cycles (2-step PCR)
68℃	30~60 sec/kb	30 - 35 cycles (2-step PCR)

* 역전사 산물(cDNA)을 template로 하는 고속 반응(5~10 sec/kb)의 경우, template cDNA 양을 total RNA ~125 ng(/50 μl 반응)이하로 설정해 주세요. 신장(extension)시간을 긴(1 min./kb)로 설정하면, template 양을 늘릴 수 있습니다(total RNA ~750 ng/50 μl반응).

Tm값 계산방법

＜중요＞
본 효소는 priming 효율이 매우 높은 효소이므로, annealing 시간을 5 sec 혹은 15 sec로 설정해주세요. Annealing 시간이 길어지면, smear 패턴(non- specific)이 생길 수 있습니다.
3 step로 smear 패턴이 나타날 경우, 2 step으로 반응조건을 변경해 주세요.

PCR 산물에 대하여

PrimeSTAR Max DNA Polymerase를 이용해 증폭한 PCR 산물의 대부분은 평활 말단이다. 따라서, 그 PCR 산물을 그대로(필요에 따라서 인산화하여) 평활 말단 벡터에 클로닝하는 것이 가능하다. 평활 말단 벡터로 클로닝에는 Mighty Cloning Reagent Set (Blunt End) (Code 6027)를 이용할 수 있다. T-vector에 클로닝 하는 경우는, PCR 산물의 3' 말단에 dA를 부가해야 한다. T-vector로의 클로닝에는 Mighty TA-cloning Reagent Set for PrimeSTAR (Code 6019)를 이용할 수 있다.

【Direct Sequencing을 할 경우】
본 효소는 3＇→5＇exonuclease 활성을 가지고 있기 때문에, Direct Sequencing을 하기 전에 phenol/chloroform 처리등으로 단백질을 제거해야 한다.

제품설명

내용

보존

일반적인 PCR 반응액조성 (Total 50 μl)

고속 PCR로 증폭할 수 있는 최적 주형량(50 μl 반응시)；

PCR 조건

PCR 산물에 대하여

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