닫기
TaKaRa
로그인  |   회원가입  |   ID/PW 찾기  
제품명/제품코드
키워드검색
검색
Mass spectrometry(MS) 분석을 위한 간편하고 빠른 단백질 분해

Capturem™ Trypsin and Pepsin

-

제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Clontech
635722
Capturem™ Trypsin
관련학술 관심상품등록 구매하기 라이선스 
20 회
383,000원 
478,000원
가격할인
11.01 ~ 12.07
제조사 페이지로 바로가기
Capturem Trypsin Protocol-At-A-Glance_030917.pdf
Clontech
635728
Capturem™ Pepsin
관련학술 관심상품등록 구매하기 라이선스 
20 회
304,000원 
379,000원
가격할인
11.01 ~ 12.07
제조사 페이지로 바로가기
Capturem Pepsin Protocol-at-a-Glance_121317.pdf

  • Proteomics 분석에 유용 - MS 분석용 샘플을 효율적으로 준비
  • 3분 안에 단백질 샘플 분해 - 장시간의 효소 반응 불필요
  • Trypsin, Pepsin을 고정시킨 membrane spin column - 효소 용액 반응에 비해 보다 효율적이고 확실한 분해 가능
  • Trypsin, Pepsin autolysis 최소화
제품설명
Mass spectrometry (MS) 분석을 위한 일반적인 단백질 분해는 약 4시간 이상 또는 Over-night의 시간이 필요한 반면, Capturem™ Trypsin과 Capturem™ Pepsin을 이용하면 실온에서 단백질 샘플을 아주 신속하고 효율적으로 분해시킬 수 있다. 다카라바이오 독자의 “Capturem™ 기술을 적용한 본 제품은 membrane에 Trypsin 또는 Pepsin이 고정된 membrane spin column 타입으로 제공된다. 일반적인 효소 용액을 이용한 단백질 분해 반응 (in-solution digestion)에 비하여, Capturem™ Trypsin과 Capturem™ Pepsin을 이용하면 단 몇 분 내에 autolyzed fragment의 혼입이 더 적은 효율적인 단백질 분해, 절단이 가능하다.

Proteomics 분석에 효율적
MS 샘플 준비 과정에서 일반적인 단백질 분해 방법인 in-solution digestion의 경우, 오랜 반응시간이 필요하다. 오랜 시간의 효소 반응은 단백질 산화 (oxidation), 기타 단백질 수식반응 (protein modification), Autolysis를 야기하는 것으로 알려져 있으며 이는 곧 펩타이드와 단백질 동정을 보다 어렵게 할 뿐만 아니라 재현성을 감소시키는 원인이 된다.
Capturem™ Trypsin과 Capturem™ Pepsin은 아주 빠르게 분해 반응을 진행하므로 이와 같은 문제를 해결할 수 있어 보다 Proteomics 분석에 효율적으로 활용될 수 있다.

빠르고 간단한 프로토콜
Capturem™ Trypsin과 Capturem™ Pepsin 제품은 mini spin column과 activation buffer를 포함하고 있으며, 빠르고 간단하게 단백질 분해 과정을 진행할 수 있다.
Activation buffer 200㎕를 mini spin column에 로딩하고 1분간 원심 분리한다. 이후, 단백질 샘플을 로딩 및 원심분리 후, Elution 과정을 통해 분해된 단백질을 용출한다 (그림 1)


그림 1. Capturem™ Pepsin Workflow
  • 샘플 전처리: 항체 샘플 (단백질 샘플)의 변성, 환원 처리
  • Activation buffer를 Capturem column에 가하여 활성화 시킨 후, 항체 샘플 용액 (50 - 800㎕)를 컬럼에 로딩한다
  • 컬럼 상에서 효소 분해가 일어나며, 2차 원심분리 과정에서 Peptide fragment가 용출된다
  • 용출된 펩타이드에 NaOH를 첨가하여 중화하여 샘플 조제를 완료한다.


그림 2. Capturem™ Pepsin을 이용한 Mouse antibody digestion
Mouse IgG (IgG1, IgG2a, IgG2b, and IgG3) 각각 100ug을 TCEP와 아세트산으로 75℃, 15분간 열을 가하여 변성시킨 후, 5% formic acid buffer로 희석하였다. Capturem™ Pepsin을 이용하여 분해 후, 각각 4ug 씩 SDS-PAGE로 분리하였다.


그림 3. HPLC profiles of lot-to-lot comparisons of Capturem™ Pepsin digests.
50ug의 아포 미오글로빈을 5% formic acid로 희석 후, 세 개의 다른 Lot의 Capturem Pepsin column을 이용하여 digestion하였다. HPLC 분석 결과, 모든 Lot 제품에서 동일한 절단 분절을 검출하였다.


그림 4. Capturem™ Pepsin과 기존의 방법 (In-solution digestion) 비교
Anti-HER2 Monoclonal Antibody 50ug을 세 가지의 다른 방법으로 Pepsin digestion 하였다: Capturem Pepsin, In-solution pepsin (4시간), In-solution pepsin (over-night). MS 분석 결과에서 Capturem Pepsin에 비하여 In-solution pepsin 방식이 왼쪽으로 이동한 것처럼 보이는데 이는 over-digestion을 의미한다.


그림 5. Capturem™ Trypsin으로 절단한 BT474 Whole-cell lysate의 Proteomics analysis
Capturem™ Trypsin으로 분해한 BT474 Whole-cell lysate를 RP-HLPC (Panel A)에서 19 separate fraction으로 단편화 후, LC/MS-MS로 분석하였다. 2개 이상의 독특한 펩타이드를 가진 모든 단백질을 Panel B에 표현하였다.


그림 6. Capturem™ Trypsin 생성된 apomyoglobin (Apo) 펩타이드의 질량분석
A deconvoluted ESI-Orbitrap mass spectrum was generated for Apo digested on a Capturem Trypsin Column, using Xtract software. Data kindly provided by: Dr. Merlin Bruening, University of Notre Dame.
적용
  • Protein characterization
  • Proteomic analysis
  • Mass spectrometry sample preparation
  • Antibody characterization
구성품 (자세한 내용은 CoA를 참조하세요)

Capturem™ Trypsin (Code 635722)

 

Capturem Trypsin Column

20개

Capturem 1X Activation Buffer

5 ㎖

Capturem™ Pepsin (Code 635728)

 

Capturem Pepsin Column

 

Capturem Pepsin 1X Activation Buffer (5% Formic Acid)

5 ㎖

보존: 실온

Keyword : 트립신,펩신,Mass spectrometry,MS,단백질,단백질 분해 효소,단백질 분해,Proteomics, Capturem,trypsin,pepsin
-
Protease(아미노산 서열 해석 이외)
C-말단 Peptide의 선택적 단리에
> Anhydrotrypsin Agarose
-Arg-X- 결합의 절단에
> Arginylendopeptidase (Mouse Submandibular Protease)
-Asn-X- 결합의 절단에
> Asparaginylendopeptidase
Mass spectrometry(MS) 분석을 위한 간편하고 빠른 ..
> Capturem™ Trypsin and Pepsin
-X-Asp(Cys)- 결합의 절단에
> Endoproteinase Asp-N
N-말단으로부터 exo형으로 Amino acid를 유리하는 ..
> Pfu Aminopeptidase I
N-말단 Methionine의 선택적 제거에
> Pfu Methionine Aminopeptidase
N-말단 Deblocking 단백질 서열 해석에
> Pfu N-acetyl Deblocking Aminopeptidase (Ac-DAP)
> Pfu Protease S
N-말단 Pyroglutamate의 선택적 제거에
> Pfu Pyroglutamate Aminopeptidase
> Trypsin, Immobilized Magnetic
-