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hiPS cell 유래의 심근세포

MiraCell™ Cardiomyocytes (from ChiPSC12) Kit

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제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Cellartis
Y50015
MiraCell™ Cardiomyocytes (from ChiPSC12) Kit
관련학술 관심상품등록 구매하기 라이선스 
1 Kit
가격문의   Y50015_e.v1610.pdf
Cellartis
Y50013
MiraCell™ CM Culture Medium
관련학술 관심상품등록 구매하기
100 ml
가격문의  

제품설명
  • 심근 세포의 순도 95%이상(cTnT양성률)
  • 항생제 선별과정 없이 심근 세포 선별
  • 자율 박동 능력을 보유
  • 각종 이온 통로 유전자를 발현(SCN5A, KCNQ1, CACNA1C, KCNH2등)
  • 각종 이온 통로 차단제(E-4031, Chromanol 293B, Verapamil, Mexiletine)에 대한 전기 생리학적 반응성

MiraCell Cardiomyocytes(from ChiPSC12)는 인간 iPS세포에서 유도한 고순도 심근세포이며 심근 세포의 성상과 기능 해석 등에 사용 가능하다. 또한 심근세포의 생리기능의 해석 뿐만 아니라 MEA(Multi-electrode array)시스템 등을 이용한 여러 약제에 의한 심장 독성 시험 등에 대해서도 폭넓게 사용할 수 있다.
본 제품은 교토 대학 iPS세포 연구소의 연구 개발된 인간 심근 세포의 제작 기술을 Takara Bio가 iHeart Japan㈜으로부터 도입하여 공동 개발한 제품이다. 본 심근세포 제작 기술은 심근 특이적 프로모터(α-MHC등)를 이용한 항생제(예: puromycine 등) 선별 과정 없이 고순도의 심근 세포를 만들었다. 그러므로 장기간의 배양 시 일반적으로 발생하는 순도의 저하가 일어나지 않는다. 90일간 배양 후에도 순도의 저하가 관찰되지 않았다(논문 투고 중).
본 제품의 제조에 사용된 human iPS cell line ChiPSC12(Code Y00285)은 feeder-free 배양 조건인 Cellartis DEF-CS 500 Culture System(Code Y30010)으로 배양되었다.

본 제품에는 세포와 인간 ES/iPS세포 유래 심근 세포 융해용 배지(MiraCell CM Thawing Medium), 심근 세포 배양용 배지(MiraCell CM Culture Medium)이 들어갔다.
내용

MiraCell Cardiomyocytes (from ChiPSC12)

vial, 1 tube

>3 x 106 cells

MiraCell CM Thawing Medium

1 bottle

20 ml

MiraCell CM Culture Medium

1 bottle

100 ml

수송
-80 ℃
보관
MiraCell Cardiomyocytes(from ChiPSC12): 액체 질소 보존
받은 즉시 액체 질소에 보관하세요.
액체 질소 보존이 불가능하면 바로 세포를 융해하여 배양하세요.

MiraCell CM Thawing Medium, MiraCell CM Culture Medium: -20℃ 이하, 융해 후 4℃
-20℃ 이하에서 동결 보존하고 사용 전에 4℃에서 overnight으로 배지를 해동을 하세요
융해 후에는 4℃에서 보존하고 MiraCell CM Thawing Medium은 1주일 이내,
MiraCell CM Culture Medium는 1개월 이내 사용하세요(다시 동결 융해는 불가).
사용 상의 주의
MiraCell Cardiomyocytes(from ChiPSC12)Kit는 iHeart Japan㈜로부터 라이선스를 받고 Takara Bio가 제조, 판매하고 있습니다.


그림 1. MiraCell Cardiomyocytes(from ChiPSC12)의 lot간 차이(3 lot 제품)의 확인
A) 심근 마커 cTnT(Cardiac TroponinT)양성률(해동 2일째)비교 결과
B) 해동 직후 및 해동 2일째 생존세포 수 비교 결과
C) MED Probes(Alpha MED Scientific Inc.)에서 FPDcF(Field potential duration corrected by Fridericia's formula)의 비교 결과 ※BPM35이상의 Probe를 사용
D) 각 lot의 IKr 저해제(E-4031)에 의한 FPDc10(FPDcF가 10% 더 연장할 때 약제 농도)비교 결과
어느 평가 방법에서도 lot 간 차이는 적은 것으로 확인됐다.


그림 2. MiraCell Cardiomyocytes(from ChiPSC12)을 이용한 약제 반응성 시험
해동한 후의 심근세포를 MED Probes(Alpha MED Scientific Inc.)에 파종 후 4~9일째에 BPM(Beats per Minute)이 35 이상을 나타내는 Probe에 대해 세포 외 전위 측정장치를 이용하여 약제 반응성을 확인했다. IKr저해제(E-4031), IKs억제제(Chromanol 293B), Na채널 및 IKr저해제(Mexiletine)에 대해서는 FPDcF의 연장, Ca채널 저해제인 Verapamil에 대해서는 FPDcF의 단축이 확인됐다. 또한 E-4031 및 Mexiletine에 관해서는 고농도시 부정맥 형태의 파형(EAD/TA; Early after depolarization/Triggered activity)이 관찰됐다.


그림 3. MiraCell Cardiomyocytes(from ChiPSC12) 심근 결합 단백질의 발현 해석
Fibronectin으로 코팅된 배양 플레이트로 계대한 해동 후의 심근 세포를 4% paraformaldehyde로 고정하고 각 단백질에 특이적인 항체를 이용하여 염색했다. 그 결과 거의 모든 세포에서 심근 마커 단백질 cTnT가 발현하는 순도 높은 심근세포임이 확인되었다(좌측). 또 MLC2A와 MLC2V의 염색상에서 MiraCell Cardiomyocytes(from ChiPSC12)는 대부분의 세포에서 심실 근육 세포 마커인 MLC2V가 발현하는 것을 확인했고(중앙). α-actinin염색으로 특징적 근절 구조가 확인되었다(우측). 그 외 각종 이온 통로 유전자의 발현(SCN5A, KCNQ1, CACNA1C, KCNH2등)에 대해서도 확인했다(데이터 비공개).

Keyword : 심근세포,심장세포,iPS유래세포,심장병,독성시험,toxicity,toxictest,독성
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