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Home > 전제품보기 > Gene transfer (virus) > 효모 · 계상균 용 Vectors > Aureobasidin A 내성 효모 형질전환 시스템
효모 및 누룩곰팡이 (Aspergillus)균 용 형질전환 시스템

Aureobasidin A 내성 효모 형질전환 시스템

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Aureobasidin A 내성 효모 형질전환 시스템
개요
Aureobasidin A 내성 형질전환 시스템은 항진균성 항생물질 Aureobasidin A(AbA)와 Aureobasidin A 내성유전자를 선택 마커로 하는 vector를 이용한 효모 또는 일부의 Aspergillus속 사상균을 위한 형질전환 시스템이다. AbA 내성 유전자는 우성이므로 하나 또는 몇 copy의 plasmid를 갖는 것만으로도 형질전환체는 Aureobasidin A 내성이 된다. 또 영양 요구성 변이를 갖지 않는 야생형 효모나 실용효모 (1배체, 다배체)를 숙주로 하였을 때도 높은 효율로 형질전환체를 얻을 수 있다.

특징
· 영양요구성 변이를 갖지 않는 야생형 효모나 실용효모 (술효모, 빵효모 등)도높은 효율로 형질전환 할 수 있다.
· 선택 배지는 완전배지 (YPD 등)에 Aureobasidin A를 첨가하는 것 뿐으로, 번잡한 영양요구성 아미노산 첨가가 필요하지 않으므로, 대장균의 경우 ampicillin첨가 배지에 의한 선택과 같이 형질전환체를 스크리닝 한다. · S. cerevisiae (pAUR101, pAUR112, pAUR123, pAUR135) 또는 Schizo.pombe (pAUR224) 또는 A. nidulans (pAUR316)로의 형질전환 효율은 영양요구성 선택 마커를 이용한 경우와 같은 정도이다 (효모 : lithium acetate법으로 1~5×104 형질전환체/㎍ DNA, 사상균: protoplast-PEG법으로 102~103형질전환체/㎍ DNA).

[주의]
1) 본 제품은 연구용 이외의 목적에는 사용할 수 없습니다. 특히 사람이나 동물의 의료, 임상진단에는 사용하지 마십시오. 또 식품, 화장품, 가정용품 등으로 사용할 수 없습니다.
2) 본 제품을 연구목적 이외에 사용하는 경우는 사전에 당사로 문의하여 주십시오.

<Aureobasidin A 내성 형질전환 시스템의 개요>

형질전환 숙주

AbA 내성 유전자

대장균· 효모 Shuttle 벡터

벡터의 특징

Saccharomyces cerevisiae*

AUR1-C

pAUR101

염색체 삽입형 vector

pAUR112

plasmid 상태로 자율복제 가능한 vector

pAUR123

단백질 발현용 plasmid vector

pAUR135

마커 제거형 plasmid

Schizosaccharomyces pombe

aur 1r

pAUR224

Schizo. pombe용 발현 vector

Aspergillus nidulans

aur Ar

pAUR316

Plasmid 상태로 자율복제 가능한 vector

* Aureobasidin A 내성 형질전환 시스템은 S. cerevisiae 주 전반에 사용할 수 있는 형질전환 계로서 개발되었으나 S. cerevisiae 뿐만 아니라 분류학상 S. cerevisiae의 근연종으로 생각되는 Kluyveromyces marxianusK. lactis, Candida glabrata 등의 형질전환 시스템으로도 유용하다.
Aureobasidin A 내성 효모 형질전환 시스템의 원리
Aureobasidin A는 흑색효모 Aureobasidium pullulans No. R106 주가 생산하는 항진균성 항생물질이다.
S. cerevisiae, Schizo pombe, C. albicans 등의 Candida속, 일부의 Aspergillus속에 대하여 강한 항균활성을 갖고 있어 청주효모, 빵 효모 등의 실용 효모에도 저농도 (0.1~0.4 ㎍/㎖)에서 항균효과를 나타낸다.
AUR1-C 유전자는 다카라바이오가 S. cerevisiae로부터 얻은 AbA 내성 유전자로 야생형의 대립 유전자가 Aur1 유전자(제 11염색체 YKL004W) 의 2곳의 아미노산을 유전자 조작으로 치환한 변이 유전자이다. 이 변이도입으로 AUR1-C유전자는 AbA에 대하여 특이적인 내성을 갖는다. 같은 방법으로 aur1r 유전자는 Schizo. pombe로부터, aurAr 유전자는 A. nidulans에서 각각 얻어낸 AbA 내성 유전자 이다. 이들 AbA 내성 유전자는 우성적으로 작용하기 때문에 세포 내에 1 copy가 존재하는 것만으로 내성형질을 발현하고 또 copy 수에 따라 AbA내성도가 상승한다. AUR1-C를 선택 마커로 함유한 plasmid로 형질전환하는 경우 형질전환체는 AbA 내성 클론으로서 얻을 수 있다.
또한 최근 Nagiec 등에 의하여 Aureobasidin A의 작용기작이 밝혀졌다.Aureobasidin A는 진균의 sphingolipid 생합성계의 효소인 inositolphosphorylceramide(IPC) synthase의 저해제이며, aur1 유전자는 IPC synthase를 코드하는 것으로 여겨진다.