[CAR-T cell 연구 개발 및 T cell 분화실험을 위한 새로운 T cell 확대배양 Solution]

T cell 확대배양법 (T cell expansion)은 T cell을 활용하는 다양한 실험에서 사용된다. 기본적인 T cell의 확대배양은 T cell을 Anti-CD3 antibody로 자극하여 확대배양한다. 여기에, Anti-CD28 antibody 함께 처리하면, 확대배양 효율을 더욱 향상시킬 수 있다. 하지만 Anti-CD3/CD28 antibody를 사용한 확대배양은 확대배양 후 T cell의 phenotype을 변화(높은 CD4+ T cell 비율) 시키며, Naive T cell의 비율이 낮아지는 문제점을 가지고 있다. 이와 같은 문제는, Naive T cell이 필요한 CAR(Chimeric Antigen Receptor) T cell과 T cell의 분화 실험에 큰 단점으로 작용한다.
다카라바이오에서는 기존의 문제점을 해결하기 위해, RetroNectin^®과 Anti CD3 antibody를 활용한 T cell 확대배양법을 제공하고 있다. 이 방법은 기존의 T cell 확대배양법보다 효율을 더욱 향상시킬 수 있으며, Naive T cell의 비율을 높일 수 있다. 이에 따라, RetroNectin^®을 활용한 T cell 확대배양법은 연구자에게 새로운 대안으로 주목 받고 있다.


그림 1. T cell의 추출 및 연구과정

• T cell 확대배양 효율을 높이는 방법
• CAR-T cell 연구에 최적인 T cell 확대배양 효율 향상
• T cell 분화 실험을 위한 Naive T cell 비율이 높은 T cell 확대배양 가능

가장 효율적인 T cell의 확대배양 제품을 확인하세요.

[다카라 T cell 확대배양 제품 리스트]

Code	제품명	용량
높은 Naive T cell 비율, 효율적인 T cell의 확대배양 solution
T100A/B	RetroNectin® Recombinant Human Fibronectin Fragment	0.5 ㎎ / 2.5 ㎎
GMP grade로 임상실험에 적용 가능한 RetroNectin
T202	RetroNectin® GMP Grade	2.5 ㎎/㎖
임상적용 가능한 GMP grade의 Anti-CD3 antibody
T210	Anti-CD3 mAb GMP grade	1 ㎎ / 1 ㎖
가스 투과성 세포배양 bag으로, 기존 flask배양 대비 효율적인 세포 배양 가능
FU0005	CultiLife™ 215 Culture bag	10 매
FU0010	GT-T610 (CultiLife™ Eva) Culture bag	10 매
Human T cell 배양에 최적화된 조성으로 뛰어난 배양 효율
WK551S	GT-T551 Culture medium, 1L Bottle	1,000 ㎖

Solution 1. T cell 확대배양의 새로운 Solution
RetroNectin^® Recombinant Human Fibronectin Fragment (Code T100A/B)

• 기존의 확대배양법 (Anti-CD3/Anti-CD28) 대비 향상된 확대배양 효율^*1
• 확대배양 후에도 높은 Naive T cell 비율 유지
• CAR-T cell 연구에 최적: T cell에 도입된 유전자의 장기간 발현^*1 및 multi-function 강화^*2
• RetroNectin^® GMP grade (Code T202)으로 임상 적용 가능

그림 2. RetroNectin^®을 이용한 T cell 확대배양의 결과. RetroNectin^®을 사용하여 4일간 확대배양한 결과, 기존의 방법 대비 T cell의 생장을 약 1.5배 이상 증가시키며, Naive T cell의 비율도 높게 유지되었다.

^*1 Yu, S. S., et al. "In vivo persistence of genetically modified T cells generated ex vivo using the fibronectin CH296 stimulation method." 
   Cancer gene therapy 15.8 (2008): 508.
^*2 Hosoi, Hayato, et al. "Stimulation through very late antigen-4 and-5 improves the multifunctionality and memory formation of CD8+ T cells." 
   European journal of immunology 44.6 (2014): 1747-1758.

Solution 2. 합리적으로 고품질의 Anti-CD3 mAb GMP grade 사용하세요.
Anti-CD3 mAb GMP grade (Code T210)

• T cell 확대배양에 가장 많이 사용하는 OKT3 Clone 사용
• RetroNectin^®과 함께 사용하면 확대배양 효율을 최대로 향상
• 1 ㎎/㎖의 대용량 사이즈로, 합리적인 가격에 사용
• GMP grade로 임상연구에 사용 가능

      (A) 세포 증식률


      (B) 표현형 (CD3/CD4/CD8 비율)


      (C) K562세포의 세포 독성 활성 측정

그림 3. T cell의 확대배양에서 OKT3의 성능 비교. Peripheral blood mononuclear cell (PBMC)을 Anti-CD3 mAb의 자극하에서 5일간 배양 후, T cell 배양 배지에 적절히 희석하면서 9일간 추가 배양하였다. 확대배양 후 (A) 세포 증식률, (B) 표현형 (CD3/CD4/CD8 비율), (C) K562세포의 세포 독성 활성을 비교한 결과, Anti-CD3 GMP grade는 타사 제품과 동등한 성능을 나타내었다.

Solution 3. 배양용기만 바꿔도 세포 배양 효율 uP!
CultiLife™ 215 Culture bag (Code FU0005) & GT-T610 (CultiLife™ Eva) Culture bag (Code FU0010)

• 가스 투과성 culture bag으로, 플라스크 배양 대비 높은 세포 배양 효율
• Closed cell culture system으로 사용자에 의한 오염 최소화
• 투명한 재질로 광학현미경으로 세포 관찰 가능

그림 4. 배양 용기에 의한 T cell 증식속도의 비교. Human PMBC (Peripheral blood mononuclear cell)를 Anti-CD3 mAb의 자극하에서 4일간 배양 후, 4종류의 T cell 배양배지에 희석하여 추가로 15일간 배양하였다. GT-T610 (CultiLife™ Eva) Culture bag을 사용한 결과, 어떤 배지를 사용하여도 기존 플라스크 배양보다 높은 세포 증식률을 보였다.

Solution 4. T cell 전용 culture 배지 사용으로, 확대배양 효율 증가
GT-T551 Culture medium, 1L Bottle (Code WK551S)

• Human AB serum을 첨가없이 안정적인 T cell 확대배양
• Human T cell 확대배양 및 Lenti/Retrovirus를 이용한 transduction에도 최적 (IL-2 비포함)
• Human serum albumin (pharmaceutical grade; 의약품 등급) 및 재조합 human insulin 이외의 단백질은 첨가되어 있지 않음

그림 5. T cell 배양 배지를 사용한 T cell 확대배양의 예. Human PMBC (Peripheral blood mononuclear cell)를 Anti-CD3 mAb의 자극하에서 4일간 배양 후, 각 배지에 적절히 희석하여 10일간 추가 배양하였다. GT-T551 culture medium은 Human AB serum이 포함되지 않아도 안정적인 T cell의 확대배양이 가능하였다.