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Real Time PCR FAQs - basic

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RT-qPCR

Q1. One step RT-qPCR과 two step RT-qPCR 중 어느 것을 사용해야 할까요?
Q2. RT-qPCR의 검량선 작성을 위해 RNA와 cDNA 중 어떤 샘플이 더 적합한가요?
Q3. Total RNA 샘플 내에 gDNA 유래의 증폭은 어떻게 피할 수 있나요?
Q4. RNA input 양이 다르거나 증폭효율이 달라질 수 있는 부분은, 타겟 유전자 발현수준을 housekeeping gene (reference gene)으로 보정하여 normalization 합니다. 이때 housekeeping gene은 어떻게 선별하나요?


qPCR experimental design and data analysis

Q5. 검량선을 작성할 때는 어떤 표준 샘플을 사용하나요?
Q6. qPCR 증폭산물의 분석을 위해서는 어떠한 분석법을 사용하나요?
Q7. 적절한 반복실험 횟수는 얼마인가요?
Q8. qPCR의 감도는 어느 정도 인가요?
Q9. Ct값은 어떻게 결정되나요?
Q10. 절대정량과 상대정량의 차이점은 무엇인가요?