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Stress Marker 효소 측정

Mouse Heme Oxygenase-1 EIA Kit

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제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
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내용 (96 회)
Antibody Coated Microtiter plate
(The plate coated with monoclonal antibody to mouse Heme Oxygenase-1) (96 well:8 well×12 strips)
1 plate
Antibody-Biotin Conjugate
(The vial contains lyophilized biotin conjugated rabbit polyclonal antibody to mouse and rat heme oxygenase-1. Avoid prolonged exposure to light)
11 ㎖ 용
Standard
(The vial contains lyophilized mouse heme oxygenase-1 from spleen lysate)
1 ㎖ 용
Sample Diluent
(Each vial contains protein in a buffered solution. Use for Zero standard, and for dilution of the Standard (Vial 3) and Samples which are above the calibration curve)
11 ㎖×2
Avidin-POD Conjugate 11 ㎖ 용
Substrate Solution
(The vial contains hydrogen peroxide and tetramethylbenzidine in a buffered solution)
12 ㎖
Stop Solution (1N H2SO4) 12 ㎖
Extraction Buffer
(The vial contains 1% NP40 in PBS. Use for cell extraction)
11 ㎖
보존 4℃
제품설명
본 키트는 anti-mouse heme oxygenase -1 monoclonal antibody (GTS-1)와 anti-mouse heme oxygenase-1 rabbit polyclonal antibody를 조합한 sandwich-type의 EIA 키트이다. Mouse의 혈청, 조직, 혹은 mouse 배양 세포나 배양상청 중의 heme oxygenase-1을 간단하게 측정할 수 있다. 조작 시간은 2시간 30분이다.
*GTS-1은 케이오대학 의학부 의화학 교실 Makoto Suematsu 교수가 개발했다.
Heme Oxygenase-1
Heme oxygenase는 헤모글로빈을 비롯해 heme 단백질의 보결 분자족 (prosthetic group)인 heme을 담즙색소 (biliverdin, bilirubin)와 일산화탄소 및 환원철 (Fe2+)로 분해하는 효소이다.
Heme oxygenase 에는 2개의 isozymes (Heme oxygenase-1, Heme oxygenase-2)이 확인되었다.
Heme oxygenase-2 (HO-2)는 constitutive enzyme인 반면, Heme oxygenase-1 (HO-1)은 여러 가지 스트레스 (중금속, 내독소, 자외선, 열쇼크, 활성산소, 저산소 상태)에 의해 세포 내에 유도 발현되는 효소이다.
Heme oxygenase에 의해 heme이 분해하여 생성되는 bilirubin에는 강력한 radical 소거활성 (radical Scavenging activity)을 통한 항염증 작용이 있다. 또한 동시에 생성되는 일산화탄소에는 혈관 확장을 촉진하여 장기의 혈류를 유지하는 기능이 있다고 한다.
원리
Precoat type two-step sandwich-type EIA법
필요한 시약
Washing Buffer : PBS containing 0.1% Tween 20
조작법
샘플 및 Standard100 ㎕를 antibody plate에 첨가
계속해서 Antibody- Biotin Conjugate 100 ㎕ 첨가
      ↓20~30℃, 1시간 반응
      세정 3회(0.1% Tween/PBS)
      ↓
      Avidin-POD Conjugate 100㎕ 첨가
      ↓20~30℃, 1시간 반응
      세정 4회(0.1% Tween/PBS)
      ↓
      Substrate solution 100㎕ 첨가
      ↓20~30℃, 15분간 반응
      Stop solution 100㎕ 첨가 후, 흡광도(450 nm) 측정
성능
측정범위 : 0.125~8.0 ng/㎖
검출감도 : 0.125 ng/㎖
특이성 : Mouse 및 Rat HO-1에 반응하고, HO-2에는 반응하지 않는다. Mouse 및 Rat HO-1은 측정 가능하지만 human, rabbit, guinea pig HO-1은 측정 대상에서 제외된다. Rat의 HO-1 표준품을 조합함으로써 Rat HO-1 측정도 가능하지만 그 목적에는 2개의 monoclonal antibody를 이용한 Rat Heme Oxygenase-1 EIA Kit (TaKaRa code MK124)를 사용할 것을 권장한다.
측정시간 : 2시간 30분
검체 : 혈청, 장기추출물, 세포배양상청 검체량은 100 ㎕ /assay well이 필요
측정상의 주의
  1. 조직 추출물이나 혈청을 측정 샘플로 사용하는 경우 스트레스의 정도에 따라 heme oxygenase -1의 발현량이 크게 다르기 때문에 예를 들어 2배 희석계열 등을 조제한 다음 측정을 해서 검량선 내에 들어갔을 때 농도를 환산하십시오.
  2. 원액을 샘플로 이용한 경우 측정값은 혈청 혹은 조직 중의 고농도 단백질의 영향에 의해 2배 희석액을 샘플로 이용한 경우의 측정값보다 낮은 값으로 측정되는 경우가 있습니다. 지속적인 실험에서는 항상 동일한 희석 배율로 측정하는 것이 바람직합니다.
  3. 주사시에 실시하는 에테르 마취도 스트레스 요인이 됩니다. 그 영향을 판별하기 위해 반드시 마취 컨트롤 개체를 설정하십시오.

Keyword : 스트레스,염증
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