제품 설명
TALON® Superflow Metal Affinity Resin
TALON® Superflow Metal Affinity Resin은 단단한 다공성의 agarose 유도체인 Superflow6에 TALON® 기능을 결합한 resin으로 빠른 유속과 중간 정도의 압력 (~150 psi)으로 빠르고 효과적으로 his-tagged protein을 정제할 수 있어 FPLC 정제에 적합하다.
HisTALON™ Superflow Cartridge
HisTALON™ Superflow Cartridge (Figure 1)는 TALON® Superflow Resin이 충진된 pre-packed FPLC cartridge로 5-20 cm/min의 유속을 견딜 수 있다
각각 1 ㎖ 또는 5 ㎖의 TALON® Superflow Resin이 충진된 본 cartridge는 AKTA나 FPLC 등의 중간 정도의 압력을 이용한 단백질 정제 자동화 기기나, syringe 또는 매뉴얼 방법에 모두 사용 가능하며, bacteria, mammalian 또는 baculovirus에 감염된 세포의 단백질 추출액으로부터 his-tagged protein을 효율적으로 정제할 수 있다. 1 ㎖ cartridge로 최대 20 ㎎, 5 ㎖ cartridge로 최대 100 ㎎의 Hi-tagged protein을 정제할 수 있다.
HisTALON™ Superflow Cartridge Purification Kit에는 HisTALON™ Superflow Cartridges (1 ㎖× 5 ea 또는 5 ㎖× 5 ea)와 HisTALON™ Buffer Set가 포함되어 있으며, 본 kit를 사용하면 시료 조제에서 정제까지 1시간 이내에 진행할 수 있다.
TALON® resin의 특징
TALON resin
TALON resin은 cobalt를 이용해 his-tagged protein을 정제하는 immobilized metal affinity chromatography (IMAC) resin이다. Cobalt는 nickel보다 his-tagged protein에 대해 높은 특이성을 나타내므로 his-tagged protein을 고순도로 정제할 수 있다.
Cobalt를 포함한 결합 부위
TALON® Metal Affinity Resin은 결합 부위에 cobalt 이온을 포함하고 있어, his-tagged protein에 대해 매우 높은 특이성을 가지고 있다. Cobalt 이온을 포함한 TALON® 결합부위는 histidine의 위치에 매우 까다로워 histidine이 공간적으로 연속해 있거나, 가까이 위치한 (6x HN tag, HAT tag 등) 단백질만 resin에 결합할 수 있다. 반면 nickel 기반의 resin (Ni-NTA resin 등)은 이러한 특이적인 서열이 아닌 histidine이 불규칙하게 배치된 서열에도 결합하므로, 상대적으로 cobalt 기반의 TALON® resin이 nickel에 비해 his-tagged protein을 특이성 높게 정제할 수 있다.
금속이온 탈락이 적은 균일한 matrix 구조
Cobalt resin은 nickel resin에 비해 더 균일한 구조를 가진다. TALON® resin은 3차 포켓구조를 형성하며 각각 3개의 carboxyl 그룹과 하나의 질소원자가 cobalt 양이온과 결합한 구조로, 이러한 구조는 cobalt 이온이 2개의 인접한 histidine 잔기와 결합되도록 한다. 따라서 cobalt 이온이 매우 단단하게 결합되어 있어 resin에서 누출되지 않는다. 반면 nickel resin은 nickel 이온이 TALON® ligand와 유사한 3차 포켓구조나 평면구조, 즉 2개의 다른 배위구조를 형성할 수 있어 TALON®에 비해 구조가 덜 균일하다. 평면 구조에서 nickel 이온은 2개의 carboxyl 그룹과 하나의 질소원자에 결합하고 있어 TALON®에 비해 결합이 약하고 nickel 이온을 강하게 유지할 수 없어 resin에서의 누출이 일어난다. 균일한 matrix를 형성하는 TALON® Metal Affinity Resin은 여러 정제 조건 하에서 높은 결합능력을 가지므로 확실하게 his-tagged protein을 정제할 수 있다.


그림. TALON® Superflow 를 이용한 6xHis-GFPuv의 FPLC 정제
TALON® Superflow resin (B)를 이용한 결과, Nickel-NTA (A) 보다 빠른 유속, 짧은 washing 과정으로 6xHis-GFPuv를 정제할 수 있었다. 단백질은 sodium phosphate 50mM, 0.3M NaCl, pH7.0로 추출하여 필터링하였다.
(A) 여과액 3.2 ㎖를 0.5㎖/min으로 loading 한 뒤, 결합하지 않은 물질은 extraction buffer에 10 mM imidazole이 추가된 buffer로 washing 하였다. 그 결과, 단백질은 20 mM imidazole (peak II)과 250 mM imidazole (peak III)로 용출되었다.
(B) 여과액 3.2 ㎖를 1 ㎖/min 으로 loading 한 뒤, 결합하지 않은 물질을 동일한 추출 버퍼로 washing하고 150 mM imidazole (peak II)로 elution하였다.


그림. HisTALON™ FPLC Cartridges (1 ㎖ & 5 ㎖) & TALON® Superflow Metal Affinity Resin
보존
HisTALON™ Superflow Cartridges：4℃
Components & Storage Conditions
각 제품 구성물과 보관조건은 Certificate of Analysis 를 참조하십시오.
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