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DNA의 5-methylcytosine을 간단하게 bisulfite 처리

MethylEasy™ Xceed Rapid DNA Bisulphite Modification Kit

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제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
HGS
GE004
MethylEasy™ Xceed Rapid DNA Bisulphite Modification Kit
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40회분
316,000원 
395,000원
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02.20 ~ 03.31
GE004_Methyl.pdf

  • DNA중 시토신(cytosine) 잔기의 변환에서 회수까지 불과 90분
  • 50 pg의 genomic DNA로 검출 가능
  • 높은 변환 효율
제품 설명
본 제품은 DNA메틸화 상태를 해석하기 위한 제품으로 개량된 bisulfite (아황산 수소 나트륨)법을 이용하여, DNA중인 메틸화되지 않은(비 메틸화) 시토신 잔기를 우라실(uracil)로 변환한다. 한편 메틸화 시토신(5-mC)은 본 처리에 의해서 변환되지 않기 때문에 메틸화 시토신과 비 메틸화 시토신을 구별할 수 있다.
Bisulfite 처리 후에 비 메틸화 DNA와 메틸화 DNA는 다른 염기 서열을 가지게 되므로, PCR증폭 후에 sequencing, 제한효소 처리 등의 방법으로 DNA메틸화를 분석할 수 있다.
본 제품을 이용하면 불과 50 pg의 DNA로도 검출이 가능하며, bisulfate 처리 후 사용이 편리한 컬럼을 이용하여 DNA를 회수한다.
본 제품은 기존 제품에 비해서 짧은 시간에 경제적으로 실험이 가능하며, 배아 발생, 유전자 발현, 크로마틴 기능, 유전체 각인, 암 등 질병 연구의 DNA메틸화 분석에 유용하다.

[추가 실험을 위한 PCR증폭시]
Bisulfite 처리된 DNA를 주형으로 bisulfite sequenceCOBRA법을 위한 PCR 증폭을 진행하는 경우, TaKaRa EpiTaq HS (for bisulfite-treated DNA)(Takara Code R110A/B)의 사용을 권장한다.
또한 Real Time PCR과 end point PCR에서 메틸화 특이적 PCR (Methylation Specific PCR: MSP)를 분석하는 경우에는 EpiScope MSP Kit (Takara Code R100A/B)의 사용을 권장한다.
내용

Reagent 1

5.0 ml× 2

Reagent 2

3.3 g× 2

Reagent 3

10.6 ml

Reagent 4

5.5 ml

Reagent 5

5.0 ml

Control Sample 1 (미처리 DNA)

40 μl

Control Sample 2 (bisulfite 처리된 DNA)

20 μl

Control Primer 3A (1st PCR용 프라이머)

40 μl

Control Primer 3B (2nd PCR용 프라이머)

40 μl

Purification Columns

40 개

Collection tubes

2 ml tube× 40

Bisulfite 원리
Bisulfite 처리에 의해 DNA 분자의 시토신 잔기를 우라실로 변환한다.

Bisulfite 처리와 PCR 증폭
Bisulfite 처리로 DNA중 메틸화되지 않은 시토신 (비 메틸화 시토신)은 우라실로 변환되고, 메틸화 시토신(mC)은 변환되지 않는다. 따라서 bisulfite 처리로 메틸화 시토신과 비 메틸화 시토신을 구별할 수 있다.

수송 실온
보존
Control Sample 1,2, Control Primer 3A, 3B는 수취 후, -20 ℃에서 보관

* MethylEasy는 Human Genetic Signatures사의 트레이드 마크입니다.

Keyword :
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Methylated DNA 관련 효소
> DNA 메틸화 해석에 이용 가능한 CpG 메틸화에 영향을 받는 제한 효소
> McrBC
DNA의 5-methylcytosine을 간단하게 bisulfite 처리
> MethylEasy™ Xceed Rapid DNA Bisulphite Modification Kit
5-hydroxymethylcytosine 잔기(5hmC) 수식효소
> T4-β-glucosyltransferase
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