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Bisulfite 처리 후의 DNA PCR 증폭에 최적

TaKaRa EpiTaq HS (for bisulfite-treated DNA)

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제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Takara
R110A
TaKaRa EpiTaq HS (for bisulfite-treated DNA)
관련학술 관심상품등록 구매하기 라이선스 
250 U
307,000원  R110A_e.v1111Da.pdf, R110A_DS.v1402Da.pdf
Takara
R110B
TaKaRa EpiTaq HS (for bisulfite-treated DNA)
관련학술 관심상품등록 구매하기 라이선스 
1,000 U
(250 U x 4)
1,105,200원 


  • Uracil(U)을 많이 포함한 DNA 증폭에 최적
  • Anti-Taq antibody를 이용한 hot start PCR 효소로 비특이적 증폭 억제
  • GC-rich target, AT-rich target의 효율인 증폭 가능
  • 증폭 산물의 3'말단에 A가 부가, 그대로 TA 클로닝에 사용 가능
제품설명
TaKaRa EpiTaq™ HS (for bisulfite-treated DNA)는 bisulfite sequencing이나 COBRA법 등의 분석을 위해 bisulfite 처리 후 Uracil을 많이 포함하는 DNA를 주형으로 PCR 증폭시 최적인 PCR 효소이다.
Bisulfite 처리한 DNA는 PCR 반응성에 변화가 있을 수 있지만, 본 효소는 마그네슘 농도나 dNTP 농도를 조정함으로서 증폭 효율, 반응 특이성을 조절할 수 있기 때문에 지금까지 증폭할 수 없었던 타겟에서도 양호한 증폭을 실시할 수 있다.
본 효소는 anti-Taq antibody를 포함한 hot-start PCR 효소로 고온 가열할 때까지는 anti-Taq antibody가 효소에 결합해 polymerase 활성을 억제하기 때문에, PCR cycle 전의 mis-primming이나 primer dimer에서 유래하는 비특이적 증폭을 막을 수 있다. Anti-Taq antibody는 PCR initial denaturation 과정에서 변성되어 분리되므로, 효소 활성화를 위한 별도의 과정을 추가할 필요가 없다.

[주의] Bisulfite 처리한 DNA를 이용하여, 메틸화 특이적 PCR (Methylation Specific PCR: MSP) 분석을 진행할 경우에는 EpiScope® MSP Kit (Code R100A/B)의 사용을 추천한다.
내용 (50 ㎕ 반응 계, 200회)

1. TaKaRa EpiTaq HS (5 U/㎕)

250 U

2. 10×EpiTaq PCR Buffer (Mg2+ free)

1 ㎖

3. dNTP Mixture (각 2.5 mM)

1.2 ㎖

4. 25 mM MgCl2

1.2 ㎖

보존 - 20℃
실험 예
1. Bisulfite 처리한 HeLa genomic DNA의 PCR
TaKaRa EpiTaq™ HS (for bisulfite-treated DNA)는 1 kb가 넘는 타겟을 포함, 다양한 사이즈의 타겟 영역에서 잘 증폭되는 것을 확인하였다.


주형

: Bisulfite 처리*한 HeLa genomic DNA (100 ng/50 ㎕ 반응액)

타겟

: CDH1, MLH1, BRCA1 gene 상류의 CpG island 영역


*MethylEasy™ XceedRapid DNA Bisulphite Modification Kit (Code GE004) 사용

2. Bisulfite 처리 DNA의 효율적인 증폭
TaKaRa EpiTaq™ HS와 타사 bisulfite 처리 DNA용 PCR 효소로 bisulfite 처리한 HeLa genomic DNA를 증폭한 결과, 두개의 타겟 모두 TaKaRa EpiTaq™ HS에서 가장 양호한 증폭을 확인하였다.


*MethylEasy™ XceedRapid DNA Bisulphite Modification Kit (Code GE004) 사용

Keyword : epigenetics,후성유전학,methylation,bisulfite DNA,methylated DNA
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PCR/qPCR 관련
특정 영역의 DNA Methylation을 해석 가능
> EpiScope® MSP Kit
Bisulfite 처리 후의 DNA PCR 증폭에 최적
> TaKaRa EpiTaq HS (for bisulfite-treated DNA)
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