제품설명
본 제품은 human iPS세포 유도용 재조합 retrovirus vector 제작을 위한 plasmid DNA 이다. 고효율, 고발현 유전자도입용 retrovirus vector인 pDON-5 DNA (Code 3658)에
iPS세포 유도용 유전자인 OCT3/4와 SOX2*, KLF4, LIN28과 NANOG*이 Thosea asigna virus의2A배열*1 를 삽입 시켜 1개의 벡터에 탑재되고 있다. 본 벡터와 Retrovirus
Packaging Kit Ampho (Code 6161)에 포함되는 pGP Vector 및 pE-ampho Vector를 retrovirus 조제용 293 cell 또는 293T cell 등에 co-transfection 하여 iPS cell 유도용 retrovirus를 제작할 수 있다.
이렇게 제작된 재조합 retrovirus는 RetroNectin (Recombinant Human Fibronectin Fragment) (Code T100A/B)에 대한 친화성이 높기 때문에,
목적세포에 유전자 도입시 RetroNectin을 고정화한 laboratory dish를 이용하는 것으로, 높은 유전자도입 효율을 얻을 수 있고, iPS세포유도 효율의 향상을 기대할 수 있다.
*1 5개의 유전자는 단일 mRNA로 전사되지만, 번역될 때에 2A 배열 내의 특정의 위치에서 분리되어 결과적으로 5개의 단백질이 거의 비슷한 수준으로 발현한다고
생각할 수 있다.
Vector는 다음과 유전자 정보를 바탕으로 구축했다.
| 유전자 이름 |
GenBank Accession No . |
| OCT4 |
NM_002701.4 |
| SOX2 |
NM_003106.2 |
| KLF4 |
NM_004235.3*2 |
| LIN28 |
NM_024674.4 |
| NANOG |
NM_024865.2 |
*2 현재는 NM_004235.4로 갱신되어 있어 CDS의 5’측에 9 아미노산에 상당하는 배열이 추가되었다. 본 제품의 KFL4 유전자는 N말단의 9아미노산을 포함하지 않지만,
iPS 세포 유도에 유효한 것을 확인하였다.
특징
- OCT3/4, SOX2, KLF4, LIN28, NANOG 유전자를 하나의 vector에 탑재
- iPS세포 유도용 재조합 retrovirus를 효율적으로 조제
- RetroNectin의 병용으로iPS 세포 유도 효율도 업
내용
| pDON-5 OKSLN DNA 0.5 μg/μl |
20 ㎕ |
길이 9,954 bp
보존 -20℃
pDON-5 OKSN DNA의 구조
