Lentivirus에서 titer를 측정하면 생산한 바이러스를 최대로 활용하여 장기적으로 시간과 비용을 절감할 수 있습니다. 또한 titer 측정 과정에서 lentivirus packaging 과정의 성공 여부 확인과 copy 수 조절을 통한 유전자 발현량 조절이 가능해집니다.

주요제품 3종 비교

Titer는 항생제 내성 유전자 혹은 형광 유전자를 사용해 매뉴얼법으로도 측정할 수 있지만 이 방법은 2~10일 정도의 기간이 걸리고 실험이 복잡합니다. 또한 바이러스 회수 직후 가장 functional한 시점에서 사용이 불가능하다는 한계가 있습니다. 이때 아래 titration kit를 사용하면 이러한 한계를 극복할 수 있습니다.

IFU 값으로 단위 환산

아래에 Lenti-X™ GoStix™ Plus (Code 632180)로 측정된 결과를 IFU/㎖로 환산하기 까지의 과정을 예시로 제시했습니다. 이 방법은 qRT-PCR법이나 ELISA법에서도 동일하게 적용 가능합니다.

Lenti-X™ GoStix™ Plus (Code 632180) 결과를 전용 앱으로 분석하면 샘플의 p24 capsid 단백질을 정량할 수 있다 (ng/㎖ p24). 이를 IFU로 환산하기 위해서는 동일한 reference virus를 functional titration 방법 (FACS, antibiotic selection 등)으로 측정해야 한다 (IFU/㎖). 이 두 가지 결과값의 계수는 추후 동일한 조건에서 physical titer만 측정한 뒤 이를 Functional titer (IFU)로 환산하는데 사용할 수 있다.

Reference vector functional titer =	2.2 x 108 IFU/㎖
÷Reference vector physical titer =	525 ng/㎖ p24
Reference vector ratio =	4.2 x 105 IFU/ng p24

 

Physical titer for unknown vector (measured) =	790 ng/㎖ p24
X Reference vector ratio (from above) =	4.2 x 105 IFU/ng p24
Functional titer for vector to be (calculated) =	3.3 x 108 IFU/㎖

그림 3. Phyical titer를 functional titer로 환산하는 예시. 

Reference vector에서 Lenti-X™ GoStix™ Plus로 525 ng/㎖ p24가 나왔고 FACS로 2.2 x 10⁸ IFU/㎖가 나왔으며, unkown vector에서 790 ng/㎖ p24가 나와 이를 환산하는 상황이다.

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