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Poly(A) 이후 추가서열이 없는 scarless mRNA 합성이 가능한 linearized template vector

Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis

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제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)		 비고 사용자매뉴얼
Takara
 6146
 Template Vector (BspQ I) for T7 mRNA Synthesis
관련학술 구매하기 		10 ㎕
 109,000원  6146_DS.pdf

제품 설명
이 제품은 TriLink의 Cap analog (CleanCap Reagent AG 또는 CleanCap Reagent AG (3′ OMe))를 사용하여mRNA를 합성할 때 함께 사용할 수 있는 template이다. 이 linearized template vector에는 T7 promoter, transcription start sequence (AGG), 5’-UTR (untranslated region), 3’-UTR, Poly(A) 서열 (141 base)이 포함되어 있다. 따라서 발현시키고자 하는 유전자의 CDS (coding sequence)만 In-Fusion®을 통해 cloning 하면 human이나 mouse 등 mammalian cell에 사용 가능한 mRNA 합성용 plasmid (CleanCap Reagent AG 용)를 제작할 수 있다 (그림 1).
또한 Poly(A) 서열 바로 다음에 위치한 Type IIS 제한효소 BspQ I으로 선형화 하여 Poly(A) 이후 추가서열이 없는 mRNA 합성용 template을 제작할 수 있다 (그림 2). 이 template은 Takara IVTpro™ T7 mRNA Synthesis Kit (Code 6144)를 사용하여 간편하게 고수율로 목적 mRNA를 합성하는데 사용된다.

mRNA 합성용 plasmid의 설계 및 자세한 프로토콜은 이 제품의 사용자매뉴얼과 함께 Cloning Kit for mRNA Template (Code 6343)의 사용자 매뉴얼을 참고하세요.


그림 1. In-Fusion®을 사용한 IVT용 template plasmid 제작


그림 2. 제한효소 BspQ I 인식서열 주변 서열 및 선형화 이후의 말단서열 구조
- Type IIS 제한효소 BspQ I의 인식서열 (빨강색) 및 절단위치 (파란색)
- Type IIS 제한효소의 절단위치는 인식서열의 외부에 위치한다. 따라서 BspQ I을 사용하는 것으로 Poly(A) 이후 여분 서열이 없는 mRNA 합성용 template을 제작할 수 있다.
용도
Poly (A) 이후 추가 서열이 없는 mRNA 합성용 template 제작
내용

Linearized Template Vector (BspQ I) (50 ng/㎕)

10 ㎕

FLuc Control Fragment (BspQ I) (100 ng/㎕)

10 ㎕

* 서열 정보는 아래를 참고.
서열 정보
- Linearized Template Vector (BspQ I)
: sequence fasta 파일 바로가기
- FLuc Control Fragment (BspQ I)
: sequence fasta 파일 바로가기
벡터맵

NeoR/KanR 53～847
Ori: 1,172～1,760
CMV enhancer: 1,861～2,240
CMV promoter: 2,241～2,444

T7 promoter sequence: 2,489～2,505
Transcription start sequence (AGG): 2,506～2,508
5’UTR: 2,509～2,559
Upstream In-Fusion region (15 bp): 2,545～2,559

▼In-Fusion cloning site (linearized site): between 2,559 and 2,560

Downstream In-Fusion region (15 bp): 2,560～2,574
3’UTR: 2,560～2,672
Poly(A)141 : 2,673～2,813
BspQ I: 2,810
Poly(A) Forward Primer: 2,570～2,589
Poly(A) Reverse Primer: 2,904～2,923
주의사항
- 이 제품으로 IVT용 template vector를 만들기 위해서는 In-Fusion® Snap Assembly Master Mix (Code 638947 외) 가 필요합니다.
- mRNA 합성용 plasmid의 설계 및 프로토콜에 대한 자세한 내용은 이 제품의 사용자 메뉴얼과 함께 Cloning Kit for mRNA Template (Code 6343)의 사용자 매뉴얼을 참고하세요. 이때 CDS에 BspQ I 인식서열이 있는지 확인이 필요합니다. 절단부위 이외에 BspQ I 인식서열이 존재하는 경우, 아미노산 서열에 변화가 생기지 않는 다른 codon (eg. Alanine codon 을 “GCU”에서 “GCC”로 변경)으로 변경하여 사용하세요.
- Template plasmid에 RNase가 혼입되면 RNA의 수율이 저하되거나 fragmentation이 발생합니다. 반응에 사용하는 튜브나 마이크로파이펫용 팁을 RNA 합성 전용으로 사용하고 일회용 장갑을 착용하여 RNase가 혼입되지 않도록 주의하세요.
보존: - 20℃
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