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세포배양기질

iMatrix-511

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제품설명
iMatrix-511은 다양한 종류의 세포에 사용할 수 있는 배양 기질이며, 다능성 줄기 세포(ES/iPS세포)의 배양시 다음과 같은 획기적인 사용 사례가 보고되고 있다. 일반적으로 사람 다능성 줄기 세포(ES/iPS세포)의 배양에는 마우스 섬유 모세포에서 유래한 피더세포(feeder cell)나 Matrigel(제조사 Corning) 등이 사용되지만, 이와 같이 다른 종(예를 들어, 마우스)의 세포와 구성 성분이 확실치 않은 기본 재료를 이용해 배양한 세포는 세포 치료나 재생 의료 목적으로는 사용할 수가 없다.
iMatrix-511은 사람 다능성 줄기 세포를 장기간 배양 유지를 가능하게 한다고 보고되고 있는 laminin-511의 활성 부위만을 포함한 사람 재조합 laminin fragment이며(그림 1), 본 제품을 사용하면, 피더세포가 없는(feeder free) 조건 하에서 사람 다능성 줄기 세포를 배양할 수 있다.
또 사람 다능성 줄기 세포는 단일 세포 분산 조건하에서 미분화 상태를 유지하면서 생존하기 어려우므로, 확대 배양을 하려면 세포를 적당한 크기의 콜로니(세포 덩어리)로 해리시키는 숙련된 기술이 필요했다.
반면, iMatrix-511은 사람 다능성 줄기 세포에 대해 매우 강한 접착 활성을 가지므로, 하나(단일세포)의 사람 다능성 줄기 세포로도 배양기와의 접착성과 생존성을 높여 효율적으로 세포를 증식시킬 수 있다(그림 2, 그림 3). 또한 Matrigel을 이용한 경우와 마찬가지로 세포는 미분화 상태로 유지된다(그림 4). 본 제품을 이용하면 고품질의 균일한 사람 다능성 줄기 세포의 확대 배양이 가능하다.

[간단 프로토콜]
본 제품을 정제수로 희석해 0.1~1.5μg/cm2* 되게 세포 배양기(Dish)에 첨가
 *세포의 종류에 따라 최적 농도는 다르므로,
초기 조건 검토 시에는 0.5μg/cm2부터 시작하여 배양조건 최적화

실온에서 3시간(혹은 4℃에서 하룻밤) incubation하고 용액 제거

세포와 배양액을 넣어 세포 배양을 시작



그림 1. 라미닌(whole laminin)과 iMatrix-511의 구조 비교
iMatrx-511은 라미닌의 α 사슬, β 사슬, γ 사슬의 C말단 영역으로 구성되며, 사람 다능성 줄기 세포에서 발현되는 α 6β 1 integrin과 높은 결합 활성을 나타낸다.


그림 2. 단일세포 및 콜로니의 iPS세포 생존율 비교
3×104개의 단일 세포 또는 콜로니를 파종(seeding)하고 6시간 후 부착 세포 수를 나타내었다. iMatrix-511은 파종 때의 세포 상태에 관계 없이 높은 접착성과 생존율을 보였다. 특히 단일 세포의 경우에는 Vitronectin이나 Matrigel과 비교해 그 차이가 크게 나타났다.


그림 3. 배양시간에 따른 iMatrix-511의 효과
각종 배양 자재에 따른 iPS세포(253G1) 세포의 증식성을 나타내었다. 7.5×104개의 단일 세포를 파종(seeding)하고 24, 48, 72시간 후에 세포 수를 비교하였다(비교를 위해 Matrigel/콜로니도 같이 실험). 24시간 후의 세포배양에서는 iMatrix-511을 이용한 단일 세포는 Matrigel과 비교하여 콜로니 형성률이 높고 세포 수도 많음을 확인했다. 또 72시간 후의 세포 수는 콜로니를 파종한 Matrigel과 동등하며, 원활한 세포 증식이 되고 있음을 확인하였다.



그림 4. 단일 세포 상태에서 미분화 상태 유지 확인(면역 염색)
iMatrix-511을 코팅한 dish에서 3회 계대한 iPS세포(253G1)에 대해 각종 분화/미분화 표지 검출 항체를 이용해 분화 상태를 확인했다. iMatrix-511에 의한 배양은 Matrigel과 마찬가지로 iPS세포를 미분화 상태로 유지하고 있었다.

※그림 3. 그림 4. 데이터는 iPS Academia Japan㈜ 에서 제공 받은 사람 iPS세포 253G1주를 사용하고 얻은 결과입니다.
<사람 iPS세포 253G1주의 참고 논문>
Nakagawa, M., Koyanagi, M et al. Nature Biotechnology, 2008 Jan;26(1):101-6.Epub 2007 Nov 30.
형상
동결건조품
보존
2~15℃(차광)

Keyword :
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