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Home > 전제품보기 > 제한효소 · Quickcut > 제한효소 > Ligation-Recutting 효율 품질 규격

Ligation-Recutting 효율 품질 규격

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제한효소를 사용함에 있어 중요한 순도 검정 항목인 라이게이션-Recutting test에 대한 라이게이션-Recutting 효율 품질 규격을 일람표로 작성하였다. TaKaRa의 제한효소는 이 규격보다 높은 품질을 보증한다. 구체적인 시험방법은 다음과 같다.
라이게이션-Recutting test의 대상 기질 DNA을 우선 2~50배에 달하는 과잉량의 효소로 반응한다. 절단된 DNA를 회수하고 5’말단 농도가 0.1~1.0 μM이 되도록 T4 DNA Ligase 버퍼[66 mM Tris-HCl (pH7.6), 6.6 mM MgCl2, 10 mM DTT, 0.4 mM ATP]에 용해한다. 적당량의 T4 DNA Ligase를 첨가하여 16℃에서 1시간 또는 16~18시간 반응한다. DNA 회수 후 제한효소 반응액에 용해하고 동일한 제한효소로 DNA를 재절단한다. 이상의 결과로 ligase inhibitor, phosphatase, exonuclease의 유무를 판정한다.

*라이게이션 반응에는 TaKaRa DNA 라이게이션 kit Ver.2.1(TaKaRa code 6022)를 사용해서 26℃에서 10분간 반응하였다.