pKF3 Cloning test는 Enforcement Cloning Vector pKF3 DNA의 multi-cloning site에 하나의 절단부위만을 갖는 제한효소에 대하여 실시하였다. 이 DNA의 multicloningsite는 그 염기서열이 rpsL유전자를 coding하고 있어 rpsL유전자가 발현하면 숙주는 streptomycin 내성로부터 감수성으로 변한다. 제한효소에 exonuclease등의 미량의 nuclease가 혼입하게 되면 rpsL 유전자에 deletion이 생겨 숙주는 내성 상태로 남게된다. 이 성질을 이용하여 제한효소중에 존재하는 미량의 nuclease를 검출할 수 있다.