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Home > Learning center > Real Time PCR > 자주 묻는 질문 > Real Time PCR 시약 반응횟수 정리

Real Time PCR 시약 반응횟수 정리

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Real Time PCR 반응 횟수 정리

Real Time PCR (qPCR)은 DNA에서 타겟 서열 또는 유전자 발현을 정량하는 매우 유용한 기술이다. qPCR에는 일반적으로 주형 DNA (샘플), master mix, forward 및 reverse primer, PCR-grade water, Rox reference dye (일부 qPCR 기기)를 필요로 한다. 이때 각 반응의 reaction volume은 qPCR에 사용되는 plate 규격 등 여러 실험 조건에 따라 달라진다. 예시로 96-well은 일반적으로 well당 20 ㎕의 반응액을 사용하고, 384-well은 well당 10 ㎕의 반응액을 사용하며, 1,536-well은 2 ㎕의 반응액을 사용한다. 또한, SmartChip Real-Time PCR System (Code 640022)과 같은 high-throughput 시스템은 100 nl의 소량 반응액을 사용한다.

일반적으로, Real Time PCR kit와 master mix는 반응 횟수를 기준으로 정리되어 있다. 그러나 위에서 언급한 대로 반응 횟수는 1회 사용양에 따라 달라질 수 있고 master mix의 농도 (예, 2X, 5X)에 따라 이는 더욱 복잡해진다. 이러한 점을 정리하기 위해 특정 kit가 몇 회의 반응이 가능한지를 아래의 표에 정리하였다 (일반적인 제품 유형에 따라 정리). 각각의 특정 제품에 포함된 master mix 혹은 reaction buffer의 총 용량, 농도 및 자주 사용되는 반응액의 양에 따른 반응 횟수로 정리되었다.

■ One-step RT-qPCR kit
One-step RT-qPCR은 역전사 반응과 qPCR을 하나의 튜브에서 한번에 진행한다. 다카라는 Probe 방식과 TB Green® dye 방식의 다양한 제품을 판매하고 있고, 특히 아래 제품은 2X master mix 타입 혹은 2X reaction buffer 형태의 one step RT-qPCR kIT로 제공된다.

  • One Step PrimeScript™ III RT-qPCR Mix : 반응액의 양에 따른 반응 횟수

    Code

    2X master mix 부피

    50 ㎕

    반응액

    25 ㎕

    반응액

    20 ㎕

    반응액

    10 ㎕

    반응액

    RR600A

    4 X 625 ㎕

     (2.5 ㎖)

    100

    200

    250

    500

    RR600B

    20 X 625 ㎕

     (12.5 ㎖)

    500

    1,000

    1,250

    2,500


  • One-Step TB Green® PrimeScript RT-PCR Kit II (Perfect Real Time) : 반응액의 양에 따른 반응 횟수

    Code

    2X reaction buffer 기준

    50 ㎕

    반응액

    25 ㎕

    반응액

    20 ㎕

    반응액

    10 ㎕

    반응액

    RR086A

    3 X 840 ㎕

     (2.52 ㎖)

    100

    200

    250

    500

    RR086B

    15 X 840 ㎕

     (12.6 ㎖)

    500

    1,000

    1,250

    2,500


■ Two-step RT-qPCR kit
Two-step RT-qPCR kit는 역전사 반응으로 cDNA를 합성한 후, 합성된 cDNA를 PCR 반응액에 추가하여 실험한다. 다카라에서는 Probe 방식과 TB Green® dye 방식의 다양한 제품을 판매하고 있다.

- RT kit
다카라 qPCR용 RT kit는 high fidelity 고성능 역전사 효소 PrimeScript™를 사용해 15분만에 qPCR에 사용할 수 있는 cDNA를 높은 효율로 합성할 수 있다. 아래 제품은 5X master mix 타입 혹은 5X reaction buffer 형태로 제공된다.

  • PrimeScript RT Master Mix (Perfect Real Time), PrimeScript RT Reagent Kit (Perfect Real Time), PrimeScript RT Reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time) : 반응액의 양에 따른 반응 횟수

    Code

    5X master mix 혹은 reaction buffer 기준

    50 ㎕

    반응액

    25 ㎕

    반응액

    20 ㎕

    반응액

    10 ㎕

    반응액

    RR036A

    400 ㎕

    40

    80

    100

    200

    RR036B

    4 X 400 ㎕

     (1.6 ㎖)

    160

    320

    400

    800

    RR037A

    400 ㎕

    40

    80

    100

    200

    RR037B

    4 X 400 ㎕

     (1.6 ㎖)

    160

    320

    400

    800

    RR047A

    400 ㎕

    40

    80

    100

    200

    RR047B

    4 X 400 ㎕

     (1.6 ㎖)

    160

    320

    400

    800


- Real Time PCR kit (Probe)
다카라 probe 검출용 qPCR kit는 매우 높은 특이성, 민감도, 재현성을 가지고 있다. 아래 제품은 2X master mix 형태로 제공된다.

  • Premix Ex Taq™ (Probe qPCR), Premix Ex Taq™ (Probe qPCR), ROX Plus : 반응액의 양에 따른 반응 횟수

    Code

    2X master mix 부피

    50 ㎕

    반응액

    25 ㎕

    반응액

    20 ㎕

    반응액

    10 ㎕

    반응액

    RR390A

    5 ㎖

    200

    400

    500

    1,000

    RR390B

    2 X 5 ㎖

    (10 ㎖)

    400

    800

    1,000

    2,000

    RR390L

    5 ㎖

    200

    400

    500

    1,000

    RR39LR

    5 ㎖

    200

    400

    500

    1,000


- Real Time PCR kit (TB Green®)
다카라에서는 당사의 TB Green® intercalating dye가 포함된 qPCR kit를 사용한다. TB Green® dye는 적용 범위가 넓은 dye로, 일반적인 qPCR 방법과 장비에서 별도의 프로토콜 변경 없이 사용할 수 있다. 아래 제품은 2X master mix 형태로 제공된다.

  • TB Green® Premix Ex Taq (Tli RNase H Plus), TB Green® Premix Ex Taq II (Tli RNase H Plus), TB Green® Fast qPCR Mix : 반응액의 양에 따른 반응 횟수

    Code

    2X master mix 부피

    50 ㎕

    반응액

    25 ㎕

    반응액

    20 ㎕

    반응액

    10 ㎕

    반응액

    RR420A

    5 ㎖

    200

    400

    500

    1,000

    RR420B

    2 x 5 ㎖

     (10 ㎖)

    400

    800

    1,000

    2,000

    RR420L

    5 ㎖

    200

    400

    500

    1,000

    RR42LR

    5 ㎖

    200

    400

    500

    1,000

    RR820A

    5 ㎖

    200

    400

    500

    1,000

    RR820B

    2 x 5 ㎖

     (10 ㎖)

    400

    800

    1,000

    2,000

    RR820L

    5 ㎖

    200

    400

    500

    1,000

    RR82LR

    5 ㎖

    200

    400

    500

    1,000

    RR430A

    5 ㎖

    200

    400

    500

    1,000

    RR430B

    2 x 5 ㎖

     (10 ㎖)

    400

    800

    1,000

    2,000