´Ý±â
TaKaRa
Á¦Ç°¸í/Á¦Ç°ÄÚµå
Å°¿öµå°Ë»ö
°Ë»ö
Home > Learning center > NGS_RNA-Seq > Hot citation > ³ú ÁøÈ­ ¹× ¹ß´Þ ¿¬±¸¸¦ À§ÇÑ single cell RNA-seq

³ú ÁøÈ­ ¹× ¹ß´Þ ¿¬±¸¸¦ À§ÇÑ single cell RNA-seq

-

Better together: 2°³ÀÇ single cell RNA-seq Á¢±Ù¹ýÀ» Á¶ÇÕÇÏ¿© ³ú ÁøÈ­ ¹× ¹ß´Þ¿¡ ´ëÇÑ È¹±âÀûÀÎ ÅëÂû·Â Á¦°ø

DATE: August 20, 2021

´ÜÀÏ ¼¼Æ÷ Àü»çüÇÐ (Single cell transcriptomics)Àº °úÇÐÀÚµéÀÌ ³ú ³»ÀÇ ½Å°æÁ¶Á÷¿¡ ´ëÇØ »ý°¢ÇÏ´Â ¹æ½Ä¿¡ Çõ½ÅÀ» ÀÏÀ¸Ä×À¸¸ç, ¾Ù·± ³ú°úÇבּ¸¼Ò (Allen Institute for Brain Science)´Â ÀÌ ºÐ¾ß¸¦ ¼±µµÇÏ°í ÀÖ´Ù. ÀÌ ¿¬±¸¼ÒÀÇ ¿¬±¸¿øµéÀº ÀÌÀü¿¡ ¸¶¿ì½º ½ÅÇÇÁúÀÇ µÎ ±Ø¿¡¼­ ´ÜÀÏ ¼¼Æ÷¸¦ ºÐ¼®Çϱâ À§ÇØ scRNA-seq ½ÇÇè±â¹ýÀ» »ç¿ëÇÏ¿´°í, ´ç»çÀÇ SMART-Seq¢ç v4 Ultra¢ç Low Input RNA Kit for Sequencing (ÀÌÇÏ SSv4) Á¦Ç°À¸·Î 133°³ÀÇ °³º° ¼¼Æ÷ À¯ÇüÀ» ºÐ¼®ÇÏ¿´´Ù
* SMART-Seq¢ç v4 Ultra¢ç Low Input RNA Kit for SequencingÀº SMART-Seq¢ç mRNASMART-Seq¢ç mRNA LP·Î ¸®´º¾ó µÇ¾ú½À´Ï´Ù.

¶ÇÇÑ ³ú ¼¼Æ÷ ºÐ·ù¸¦ À§ÇØ SSv4 transcriptomic, morphological ¹× electrophysical ºÐ¼®À» ºñ±³ÇÑ ±×µéÀÇ Patch-seq Á¢±Ù¹ýÀº ÀÌ ¼¼ °¡Áö ¸Å°³ º¯¼ö »çÀÌ¿¡ ³ôÀº »ó°ü °ü°è¸¦ º¸¿©ÁÖ¾ú°í, ÀÌ·¯ÇÑ °á°ú´Â scRNA-seq ¹æ¹ýÀÌ ³ú ¼¼Æ÷ ºÐ·ùü°è¸¦ È®¸³ÇÏ´Â °­·ÂÇÑ ¹æ¹ýÀÓÀ» ÀÔÁõÇÏ¿´´Ù.
¿¬±¸¼Ò¿¡¼­ ÁøÇàµÈ °¡Àå ÃÖ±Ù ¿¬±¸¿¡¼­ Yao¿Í µ¿·á ¿¬±¸ÀÚµéÀº ´ç»çÀÇ full-length plate-seq SSv4 kit¸¦ ÀÌ¿Í ´Ù¸£Áö¸¸ º¸¿ÏÀûÀÎ scRNA-seq ¿¬±¸¿¡ Á¢¸ñ½ÃÄ×´Ù.
ÀÌ¿Í ÇÔ²² 10x Genomics¿¡¼­ °³¹ßÇÑ 3¡¯ droplet ±â¹ÝÀÇ Chromium Single Cell 3' Reagent Kit v2 (10xv2)¸¦ »ç¿ëÇÏ¿© ¸¶¿ì½º ½ÅÇÇÁú°ú Çظ¶ Çü¼º °úÁ¤¿¡¼­ ÀÌÀü¿¡ º» Àû ¾ø´Â ºÐÀÚ ±¸¼ºÀ» ±Ô¸íÇÏ¿´´Ù.
Cell¿¡ ¹ßÇ¥µÈ ±×µéÀÇ ÃֽŠ¿¬±¸¿¡¼­, ¿¬±¸¿øµéÀº ÁãÀÇ ½ÅÇÇÁú°ú Çظ¶ Çü¼º¿¡ °ü¿©ÇÏ´Â 130¸¸°³ ÀÌ»óÀÇ °³º° ´º·±ÀÇ Àü»çü¸¦ ½ÃÄö½ÌÇÏ¿´°í, ÃÑ 122¸¸ 8,636°³ÀÇ ¼¼Æ÷¸¦ 10xV2·Î, 76,381°³ÀÇ ¼¼Æ÷¸¦ SSv4·Î ºÐ¼®ÇÏ¿´´Ù. Àü»çü µ¥ÀÌÅ͸¦ ±â¹ÝÀ¸·Î ¼¼Æ÷ À¯Çü¿¡ µû¶ó clustering Çϸé, 10xV2¿¡¼­ 332°³ÀÇ cluster¿Í SSv4¿¡¼­ 324°³ÀÇ cluster°¡ »ý¼ºµÇ¾ú´Ù. Consensus clustering ¹æ¹ýÀ¸·Î 10xV2¿Í SSv4 µ¥ÀÌÅ͸¦ ÅëÇÕÇÏ¿´À» ¶§, ¿¬±¸¿øµéÀº 388°³ÀÇ °íÀ¯ cluster¸¦ ½Äº°ÇÒ ¼ö ÀÖ¾ú°í, ±× Áß 364°³´Â ´º·±À̾ú´Ù. µÎ µ¥ÀÌÅÍ ¼¼Æ®¸¦ ÅëÇÕÇÏ¿© ¾òÀº ºÎ°¡ÀûÀÎ coverage´Â ÀúÀÚµéÀÌ Å« Â÷ÀÌ ¾øÀÌ Àüü ½ÅÇÇÁú°ú Çظ¶ Çü¼º¿¡ °ÉÃÄ ¼¼Æ÷ À¯ÇüÀ» Á¤ÀÇÇÒ ¼ö ÀÖ°Ô ÇÏ¿´°í, ³úÀÇ ÀÌ·¯ÇÑ ¿µ¿ª¿¡¼­ »õ·Î¿î ¼¼Æ÷ À¯ÇüÀ» ¹ß°ßÇϵµ·Ï ÇÏ¿´´Ù.

¡°SSv4 ¹× 10xv2 ½ÃÄö½Ì µ¥ÀÌÅÍ°¡ °áÇÕµÈ consensus clustering Á¢±Ù ¹æ½ÄÀ» ÅëÇØ SSv4 ¶Ç´Â 10xv2 ½ÃÄö½Ì µ¥ÀÌÅÍ ´Üµ¶À¸·Î clusteringÇÏ´Â °Íº¸´Ù 50°³ ÀÌ»óÀÇ ¼¼Æ÷ À¯ÇüÀ» Ãß°¡·Î ½Äº°ÇÒ ¼ö ÀÖ¾ú½À´Ï´Ù.¡±

Technique

SSv4

10xv2

SSv4 + 10xv2

Total cells sequenced

76,381

1,228,636

<1,300,000

Clusters generated

324

332

388

ÀÌ·¯ÇÑ clustering Á¢±Ù ¹æ½ÄÀ» ÅëÇØ ¿¬±¸ÀÚµéÀº "¿À·¡µÈ" Çظ¶ Çü¼ºÀÌ ¼¼Æ÷ ±¸¼º °üÁ¡¿¡¼­ º¸´Ù ÃÖ±Ù¿¡ ÁøÈ­ÇÑ ½ÅÇÇÁú ¸¸Å­ º¹ÀâÇÏ´Ù´Â °ÍÀ» º¸¿©ÁÖ¾ú´Ù. ¶ÇÇÑ, ±×µéÀÇ µ¥ÀÌÅÍ´Â ½ÅÇÇÁú°ú Çظ¶ Çü¼º¿¡ °ÉÄ£ ¼¼Æ÷ À¯ÇüÀÌ ±¸¹è (gradient)·Î ±¸¼ºµÇ¾î ÀÖÀ½À» È®ÀÎÇÏ¿´°í, ÀÌ°ÍÀº ³úÀÇ Æ¯Á¤ ¼¼Æ÷°¡ ÀÌ¿ô ¼¼Æ÷¿Í °¡Àå ºñ½ÁÇÏ°í ¸Ö¸® ¶³¾îÁ® ÀÖ´Â ¼¼Æ÷¿Í °¡Àå ´Ù¸£´Ù´Â °ÍÀ» ÀǹÌÇÑ´Ù. ÀÌ·¯ÇÑ ¹ß°ßÀº ³ú°¡ ¾î¶»°Ô ÁøÈ­Çß´ÂÁö, ¹ß´Þ °úÁ¤¿¡¼­ ¾î¶»°Ô Çü¼ºµÇ´ÂÁö¸¦ ¹àÇôÁØ´Ù.

ÀÌÀü ¿¬±¸¿¡¼­ ¸íÈ®ÇÏ°Ô ÀÔÁõµÈ °Íó·³ SSv4¿Í 10xv2´Â ¸ðµÎ ÀÚüÀûÀ¸·Î »ý¹°ÇÐÀû ¹ß°ßÀ» ÃËÁøÇÏ´Â °­·ÂÇÑ ±â¼úÀÌ´Ù. ÇÏÁö¸¸ º» ¿¬±¸¿¡¼­ È®ÀÎµÈ ¹Ù¿Í °°ÀÌ ¼­·Î ´Ù¸£Áö¸¸ º¸¿ÏÀûÀÎ µÎ °¡Áö scRNA-seq Á¢±Ù ¹æ½ÄÀ» °áÇÕÇϸé Àû¿ë¹üÀ§¸¦ È®ÀåÇÒ ¼ö ÀÖ¾î ´õ ¸¹Àº »ý¹°ÇÐÀû ÅëÂû·ÂÀ» ¾òÀ» ¼ö ÀÖ´Ù. À̸¦ ÅëÇØ ¿¬±¸¿øµéÀº »õ·Î¿î ¼¼Æ÷ À¯ÇüÀ» ½Äº°ÇÏ°í ³ú¸¦ ´õ Àß ÀÌÇØÇÏ·Á´Â ¿¬±¸ ¸ñÇ¥¸¦ ¹ßÀü½Ãų ¼ö ÀÖ¾ú´Ù.

[¿ø¹®] Better together: combination of two single-cell RNA-seq approaches yields groundbreaking insights into brain evolution and development

¡á References
Yao, Z. et al. A taxonomy of transcriptomic cell types across the isocortex and hippocampal formation. Cell 184, 3222-3241.e26 (2021).