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Tet-On 3G 유도 발현 시스템

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제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)		 비고 사용자매뉴얼
Clontech
 631164
 Tet-On 3G Inducible Expression System (with ZsGreen1)
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 2,062,000원  제조사 페이지로 바로가기 x33302, x33594, x33597, x33151, x33200
Clontech
 631165
 Tet-On 3G Inducible Expression System (with mCherry)
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 2,062,000원  제조사 페이지로 바로가기 x33302, x33594, x99952, x33596, x99953, x33200, x33151
Clontech
 631167
 Tet-On 3G Inducible Expression System (EF1α Version)
관련학술 구매하기 라이선스  		Each
 2,062,000원  제조사 페이지로 바로가기 x33362, x33584, x33151, x33200
Clontech
 631168
 Tet-On 3G Inducible Expression System
관련학술 구매하기 라이선스  		Each
 2,062,000원  제조사 페이지로 바로가기 x33302, x33584, x33594, x33151, x33200
Clontech
 631187
 Lenti-X™ Tet-On® 3G Inducible Expression System
관련학술 구매하기 라이선스  		each
(Package) 		3,551,000원  제조사 페이지로 바로가기 x32766, x32786, x33200
Clontech
 631188
 Retro-X Tet-On 3G Inducible Expression System
관련학술 구매하기 LMO제품  라이선스  		Each
(Package) 		3,168,000원  제조사 페이지로 바로가기 x33346, x33548, x33557, x33558, x33014, x33200
Clontech
 631348
 Tet-On 3G Inducible Expression System (EF1alpha, ZsGreen1)
관련학술 구매하기 라이선스  		each
 2,432,000원  제조사 페이지로 바로가기 x33362, x33594, x33597, x33151
Clontech
 631337
 Tet-On 3G Bidirectional Inducible Expression System
관련학술 구매하기 라이선스  		Each
 2,292,000원  제조사 페이지로 바로가기 x33302, x33586, x33588, x33151
Clontech
 631338
 Tet-On 3G Bidirectional Inducible Expression System (with mCherry)
관련학술 구매하기 라이선스  		Each
 2,432,000원  제조사 페이지로 바로가기 x33302, x33588, x33589, x33151
Clontech
 631339
 Tet-On 3G Bidirectional Inducible Expression System (with ZsGreen1)
관련학술 구매하기 라이선스  		Each
 2,432,000원  제조사 페이지로 바로가기 x33302, x33588, x33590, x33151
Clontech
 631340
 Tet-On 3G Bidirectional Inducible Expression System (EF1alpha Version)
관련학술 구매하기 라이선스  		Each
 2,292,000원  제조사 페이지로 바로가기 x33362, x33586, x33588, x33151
Clontech
 631341
 Tet-On 3G Bidirectional Inducible Expression System (EF1alpha, mCherry)
관련학술 구매하기 라이선스  		Each
 2,432,000원  제조사 페이지로 바로가기 x33362, x33588, x33589, x33151
Clontech
 631342
 Tet-On 3G Bidirectional Inducible Expression System (EF1alpha, ZsGreen1)
관련학술 구매하기 라이선스  		Each
 2,432,000원  제조사 페이지로 바로가기 x33362, x33588, x33590, x33151
Clontech
 631346
 Tet-On 3G Inducible Expression System (EF1alpha, Bicistronic)
관련학술 구매하기 라이선스  		Each
 2,292,000원  제조사 페이지로 바로가기 x33362, x33592, x33594, x33151
Clontech
 631347
 Tet-On 3G Inducible Expression System (EF1alpha, mCherry)
관련학술 구매하기 라이선스  		Each
 2,432,000원  제조사 페이지로 바로가기 x33362, x33594, x33596, x33151
Clontech
 631363
 Lenti-X™ Tet-On® 3G Inducible Expression System (EF1alpha Version)
관련학술 구매하기 라이선스  		Each
(Package) 		3,551,000원  제조사 페이지로 바로가기 x32766, x32786, x33200

  • Doxycycline의 유/무에 따라 유전자 발현 (transcription)이 조절되는 inducible system
  • 매우 낮은 Background발현
  • Mammalian cell에서 특이성이 매우 높은 유전자 발현 유도 가능
제품설명
Tet-On®은 doxycycline의 유/무에 따라 유전자 발현 (transcription)이 조절되는 inducible system이다. 이중 Tet-On® 3G tetracycline-inducible gene expression system은 3세대의 Tet-On® system으로 다양한 분야에서 사용되고 있다. 이는 1세대와 2세대인 Tet-On® 과 Tet-On® Advanced system 대비 background 발현을 낮추고 tetracycline 유사체인 doxycycline에 대한 민감도를 향상시킨 기술이다.
표 1
3세대 Tet-on 유도 발현 시스템은 CMV promoter를 사용해 Tet-On® 3G transactivator를 발현하는 기본 시스템 Tet-On® 3G Inducible Expression System을 포함한 다양한 형태로 판매되고 있다.
  • Tet-On® 3G Inducible Expression System (EF1alpha Version) (Code 631167 외): EF1α promoter를 사용하여 CMV promoter에서는 시간이 지날수록 발현이 감소하는 세포 (e.g. hematopoietic cells, stem cells)에서도 Tet-On® 3G transactivator를 일정하게 장기간 발현할 수 있다.
  • Tet-On® 3G Bidirectional Inducible Expression System (Code 631340 외): Bidirectional promoter를 사용하여 두가지 유전자 발현을 동시에 유도할 수 있다. 이때 두 유전자 모두 동등한 수준으로 발현되며 이를 다양한 응용 분야에서 사용할 수 있다.
    - 같은 세포에서 두 종류의 목적 유전자를 동시 발현
    - 직/간접적인 측정이 어려운 목적 유전자의 발현을 리포터 유전자의 동시 발현으로 모니터링
    - 리포터 유전자의 발현을 모니터링하여 유도 발현이 높고 background가 낮은 clone 선별
  • Tet-On® 3G Inducible Expression System (with mCherry / with ZsGreen1 외) (Code 631342 외): IRES (internal ribosome entry site) 서열을 사용해 목적 유전자와 적색 (with mCherry) 혹은 녹색 (with ZsGreen1) 형광 단백질을 같이 발현시킬 수 있다. 형광 단백질과 목적 유전자는 동일한 RNA 전사체에서 별도로 두 단백질로 유도 발현되며 이 형광 단백질을 사용해 doxycycline 첨가 시 목적 유전자의 유도 발현 효율이 높은 clone을 선별하는데 사용할 수 있다.
  • Tet-One® system (Code 634301 외): 일반적으로 사용하는 Tet-On® 3G system은 Tet-On® 3G transactivator와 tetracycline에 반응하는 유도 발현 promoter (PTRE3G)를 각각 가지고 있는 2 vector system이나, 본 제품은 1 vector system으로 실험의 편의성을 증가시켰다.
  • PTRE3GV promoter를 가진 lentivirus또는 retrovirus를 생산하는 Lenti-X™/Retro-X™ Tet-On® 3G Inducible Expression System을 사용하면 virus 생산에 필요한 viral packaging system을 한번에 준비할 수 있다.
내용
- 각 제품의 사용자 매뉴얼을 참고하세요.

주의) 이 제품에 포함된 pTRE vector는 plasmid 제작 시 일반적인 plasmid보다 수율이 낮다. 따라서 수율을 높이기 위해 평소보다 배양액 양을 늘려서 사용하는 것을 추천한다.
또한, 시중의 plasmid purification kit를 사용하는 경우 low copy plasmid용 프로토콜을 사용하는 것을 권장한다.
특징
- Bakcground 감소: promoter 서열을 최적화하여 기존의 PTIGHT 대비 background 발현을 5~20배로 감소시켰다. (그림 1.)
- Dox에 대한 민감도 증가: Tet-On® 3G regulator vector의 서열을 최적화하여 doxycycline에 대한 민감도가 대폭 증가되어 보다 낮은 농도의 Dox (5~10 ng/㎖)에서도 발현을 유도할 수 있다. 단 10 ng/㎖를 하룻밤 처리하는 것으로 매우 높은 발현을 유도할 수 있는 고감도의 시스템이다.
- 강한 발현 유도 비율: Tet-On® 3G는 기존의 Tet-On 및 Tet-Off system과 같이 높은 최대 발현 수준을 유지하면서도 background를 크게 줄였기 때문에 발현 유도 시 매우 높은 발현 유도율을 보인다 (그림 2). MCF7 세포를 이용한 실험에서는 최대 27,000배의 유도 비율이 확인되었다.

Tet System Approved FBS
Tet-On® 3G system은 Tet System Approved FBS (Code 631107 외)와 함께 사용하는 것이 중요하다. Tet-On® 3G system doxycycline에 대한 감도가 매우 향상되었기 때문에 tetracycline이 포함되지 않은 FBS를 사용해야 한다. Tet System Approved FBS (Code 631107 외)는 Tet-On® 3G system의 background발현에 영향을 미치지 않는 점이 검증되었기 때문에 해당 제품을 사용하는 것을 추천한다. 각 Tet-On® 3G system에는 Tet System Approved FBS (Code 631107 외) 50 ㎖이 포함되어 있다.

그림 1. PTRE3G 프로모터의 낮은 background발현
Tet-On® 3G system과 Tet-On® Advanced system을 사용하여 HEK293 세포에 각각 regulatory vector와 response vector (luciferase)를 transfection 하였다. 이후 세포를 Dox +/- (0, 50, 500 ng/㎖) 상태로 24시간 배양 후 luciferase의 발현을 측정하였다. 그 결과, Dox가 없는 상태에서는 Tet-On® 3G system에서는 background 발현이 매우 낮았고 (확대된 부분), Dox가 처리된 조건에서는 둘다 매우 강한 발현을 보이는 것을 확인할 수 있다.

그림2. 발현 유도율 (induction rate)이 향상된 Tet-On® 3G 시스템
Tet-On®, Tet-On® Advanced, Tet-On® 3G 세가지 시스템을 사용해 HEK 293 cell과 HeLa cell에 regulatory vector와 response vector (luciferase)를 transfection 후 1 ㎍/㎖ doxycycline으로 luciferase 유전자를 발현시켰다. 이후 18시간 이후 3반복으로 luciferase 활성을 측정한 결과 Tet-On® 3G system이 가장 높은 발현 유도율을 보이는 것을 확인할 수 있었다.

그림3. 민감도가 향상된 Tet-On® 3G 시스템
Genome의 같은 위치에서Tet-On® 3G 와 Tet-On® Advanced의 두 가지 프로모터에 의해 안정적으로 luciferase 유전자를 발현하는 HLF33 cell-line에서 Dox 농도를 바꿔가며 luciferase의 발현량을 측정하였다. 그 결과 5~10 ng/㎖에서는 Tet-On® 3G의 cell-line에서 100~150배 높았고, 50 ng/㎖에서는 발현량이 4.6배 높아졌다.
(University of Erlangen, W. Hillen et. al)

그림4. 10 ng/㎖의 Dox에서도 고감도로 작동하는 Tet-On® 3G

그림5. 매우 높은 S/N ratio의 Tet-On® 3G를 사용한 세포주
세 종류의 Tet-On® 3G cell-line에 response vector (luciferase)를 transfection 했다. 이후 Dox +/- 상태에서 24시간 배양 후 luciferase 활성을 측정한 결과, 모두 수천배의 S/N ratio를 보였다.
용도
- Mammalian cell에서 유전자 발현 유도
- 독성 유전자 발현 제어
- in vivo에서의 목적 유전자 발현 유도
관련제품
- Any vector, any insert, any site로 DNA assembly, In-Fusion® Snap Assembly Master Mix (Code 638947)
- In-Fusion®에서 최고의 cloning 효율을 위한 전용 E.coli comp.cell, Stellar™ Competent Cells (Code 636763)
- 다양한 cell에 DNA / RNA / 단백질 모두 적용 가능한 transfection 시약, TransIT-X2 Dynamic Delivery System (Code MIR 6000)
- 내 cell에 맞는 Mirus의 최적 transfection 시약 찾기 online tool, Reagent Agent®

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