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제목 : [Cloning]Ligation이 어렵고, 형질전환 효율이 낮을때주의할 점은 무엇인가?

작성자 : 다카라코리아

Ligation 반응 시간을 연장한다.
DNA 용액의 염 농도가 높으면 ligation 효율이 저하 된다. 특히 에탄올 침전시의 아세트산 암모늄 염은 저해 작용을 나타내기 때문에, 에탄올 침전시에는 염이 남지 않게 정제 과정을 실시한다.
인서트 DNA를 아가로스 겔로부터 잘라 정제할 때 UV 조사에 의해 DNA가 손상을 받는다. DNA에 UV 조사시간을 가능한 한 짧게 한다 (특히 300 nm 이 하의 단파장 영역 UV 조사시). 또한, 시판되는 아가 로스 겔로부터 DNA를 추출하는 키트 중 컬럼에서 의 용출액을 그대로 ligation에 이용하는 키트의 경 우에는 최종적으로 얻은 용출액을 에탄올 침전하고 버퍼를 교환하면 ligation 효율이 개선되는 경우가 있다.
DNA Ligation Kit＜Mighty Mix＞의 Ligation Mix는 융해 후 반드시 파이펫으로 잘 혼합하고 나서 사용 한다. 혼합이 불충분한 경우, 조성이 불균일하여 안 정된 결과를 얻을 수 없는 경우가 발생할 수 있다