PCR ÃʱâÀÇ mispriming¿¡ ÀÇÇÑ ºñƯÀÌÀûÀÎ ÁõÆøÀ» ÁÙÀ̱â À§ÇÏ¿© hot start¿ë È¿¼Ò¸¦ ±ÇÀåÇÑ´Ù. ±× Áß TaKaRa Taq¢â hot start versionÀÌ multiplex PCR¿¡ ÀûÇÕÇÏ´Ù.
¡Ø TaKaRa Ex Taq¢ç hot start version¿¡¼´Â ÷ºÎµÈ bufferÀÇ Mg2+ ³óµµ°¡ TaKaRa Taq¢â hot start version¿¡ ÷ºÎµÈ buffer º¸´Ùµµ ³ô±â ¶§¹®¿¡, ºñƯÀÌÀû ÁõÆøÀÌ ÀϾ±â ½±´Ù.
¹ÝÀÀ°è ±¸Ãà½Ã¿¡´Â ´ÙÀ½ »çÇ×À» °í·ÁÇØ¾ß ÇÑ´Ù.
[ÁõÆø »ê¹° ¼³Á¤°ú primer ¼³°è]
- Primer ¼³°è½Ã Foward¿Í ReverseÀÇ PrimerÀÇ Tm°ª Â÷À̸¦ °¡´ÉÇÑ ÀÛ°Ô ÇÏ°í GC ÇÔ·®À» °¡´ÉÇÑ °ñ°í·ç ÇÑ´Ù.
- PCR ¹ÝÀÀÀÇ ÁõÆø È¿À²ÀÌ °°µµ·Ï ¼³Á¤ ÇÑ´Ù. ¡¤ ÁõÆø »ê¹°ÀÌ 1,000 bp À̳»°¡ µÇµµ·Ï ¼³Á¤ ÇÑ´Ù.
- ¼³°èÇÑ primer¿¡ ´ëÇؼ´Â ¹Ì¸® ½ÇÇèÇÏ¿© ºñƯÀÌÀû ÁõÆø À¯¹« ¹× ¹ÝÀÀ¼ºÀ» È®ÀÎÇÏ°í, template¸¦ ÷°¡ÇÏÁö ¾ÊÀº negative controlµµ µ¿½Ã¿¡ ¹ÝÀÀÇÏ¿© primer dimerÀÇ À¯¹«¸¦ È®ÀÎ ÇÑ´Ù. ±× °á°ú, ºñƯÀÌÀû ÁõÆøÀÌ ¸¹Àº primer´Â »ç¿ëÇÏÁö ¾Ê´Â ÆíÀÌ ÁÁ´Ù(ºñƯÀÌÀû ÁõÆø »ê¹°ÀÌ ÀûÀ» °æ¿ì, multiplex PCR·Î ÇÏ¸é »ç¶óÁö´Â °æ¿ìµµ ÀÖ´Ù).
[¹ÝÀÀÁ¶°Ç]
- Extension ½Ã°£: 1,000 bp±îÁöÀÇ multiplex PCRÀÎ °æ¿ì, 72¡É¿¡¼ 1ºÐÀ» ±âÁØÀ¸·Î ¹ÝÀÀÇÏ°í ÁõÆø·®ÀÌ ÃæºÐ ÇÏÁö ¾ÊÀ» °æ¿ì´Â extension ½Ã°£À» ±æ°Ô ÇÑ´Ù(extension ½Ã°£À» ÇÊ¿ä ÀÌ»óÀ¸·Î ±æ°Ô ÇÏ¸é ºñƯÀÌÀû ÁõÆøÀÌ ¹ß»ýÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù).
- Annealing ¿Âµµ: 1¡É °£°ÝÀ¸·Î ÀûÀýÇÑ ¿Âµµ¸¦ °ËÅä ÇÑ´Ù(annealing ½Ã°£À» ÇÊ¿ä ÀÌ»óÀ¸·Î ±æ°Ô ÇÏ¸é ºñƯÀÌ Àû ÁõÆøÀÌ ¹ß»ýÇÒ ¼ö ÀÖ´Ù).
- PCR ÁõÆøÀÌ ³¡³ ÈÄ, 72¡É, 10ºÐÀÇ stepÀ» Ãß°¡Çϸé smear Çö»óÀ» ÁÙÀÏ ¼ö ÀÖ´Ù.