• TCR-alpha, TCR-beta chain을 동시에 또는 개별적으로 NGS Library 제작 가능
• Complete V(D)J sequence information: T-cell receptor (TCR)의 V(D)J 가변영역 (V(D)J variable region의 Full-length sequencing
• Flexible sample inputs: 소량의 Human blood RNA sample (10ng - 3ug) 또는 intact lymphocytes (50 - 10,000 purified T cells)에서 NGS Library를 제작 가능
• Illumina-ready sequencing libraries: ligation-independent 방식으로 illumine adaptor 및 index sequence 부착 가능
• Exceptional sensitivity, and excellent reproducibility

제품설명

SMARTer Human TCR a/b Profiling Kit은 T-cell receptor (TCR) repertoire의 NGS 분석을 위한 Illumina platform NGS Library 제작 키트이다. 본 제품은 미량의 Human blood RNA sample (10ng - 3ug), 또는 intact lymphocytes (50 - 10,000 purified T cells)로부터 TCR 전사체의 V(D)J 가변영역 (variable region) 분석을 위하여 5’ RACE 유사 기술을 접목하였으며, TCR mRNA의 Full length sequence를 분석할 수 있다. 본 제품을 이용하면 TCR-α, TCR-β chain을 동시에 또는 chain에 대한 라이브러리를 제작하여 분석할 수 있다.
Multiplexing PCR을 이용하는 기존의 TCR profiling 방법과 달리, 본 제품은 각각의 TCR-α와 TCR-β chain에 대한 single primer를 사용하는 2단계의 PCR 방법으로 Illumina용 라이브러리를 증폭한다.
본 제품은 LNA 기술이 결합된 SMART (Switching Mechanism at 5’ End of RNA Template)법을 이용하므로 민감도가 매우 높고 편향성이 적은 TCR mRNA sequence 분석을 할 수 있다.


그림 1. Protocol overview and timeline




그림 2. SMARTer TCR profiling 기술의 Library 제작 과정 및 원리
Panel A. TCR subunit mRNA의 역전사반응과 PCR 증폭 과정
Panel B. TCR-α, TCR-β chain의 증폭을 위한 semi-nested PCR


그림 3. TCR sequencing library의 Electropherogram profiles
Panel A. Typical Fragment Analyzer profile of sequencing library for TCR-α and TCR-β, obtained from peripheral blood leukocyte RNA Panel B. Typical Bioanalyzer profile of sequencing library for TCR-α and TCR-β, obtained from peripheral blood leukocyte RNA (same library as Panel A) Panel C. Typical Fragment Analyzer profile of sequencing library for TCR-α and TCR-β, obtained from monoclonal Jurkat T-cell RNA. Panel D. Typical Bioanalyzer profile of sequencing library for TCR-α and TCR-β, obtained from Jurkat T-cell RNA (same library as Panel C)

Application

구성품 (자세한 내용은 CoA를 참조하세요)