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Home > 전제품보기 > 제한효소 · Quickcut > 제한효소 > Universal Buffer · Basal Buffer에 의한 제한효소 활성 표시 시스템

Universal Buffer · Basal Buffer에 의한 제한효소 활성 표시 시스템

-

Universal buffer 및 basal buffer에서의 제한효소 상대활성 비교

당사의 제한효소에는 최적의 universal buffer (5종의 universal buffer 중 1종, 아래에서 하늘색으로 표기)가 함께 제공된다. 최적의 universal buffer에서의 각 효소 활성을 100%로 표기, 그 외에 다른 universal buffer에서의 상대활성은 최적의 universal buffer 대비 상대 활성으로 표기하였다.
( ) 안의 수치는 star activity 활성에 영향을 받을 가능성이 있는 버퍼를 나타내며, 이러한 활성을 방지하려면 파란색이나 분홍색으로 강조 표시된 버퍼를 사용하는 것이 좋다.
몇몇 특정 제한효소 (Acc III, Bal I, Bcn I, Bgl I, Bpu1102 I, Cfr10 I, Eco52 I, Nru I, PshB I, SnaB I, Ssp I, Taq I 및 VpaK11B I)는 각 제한효소에 특화된 basal buffer와 함께 제공되며, 이러한 basal buffer의 성분은 제한효소에 따라 다르다.

아래의 표에서 universal buffer에 따른 제한효소의 상대활성과 buffer 사용 가이드를 확인할 수 있고, 그 외에 Double digestion에 대한 자세한 내용은 ‘Double digestion buffer 선택가이드’ 페이지를 참고한다.

제한효소

상대 활성 (%)

L

M

H

K

T + BSA

Basal***

Aat II

<20

<20

<20

<20

100

120

Acc I

20

100

<20

(<20)

160

80

Acc II

(260)

100

<20

20

200

160

Acc III

(<20)

(<20)

20

(80)

(<20)

100

Afa I

60

60

40

60

100

100

Afl II

20

80*

<20

<20

140

120

Alu I

100

100

<20

40

200

120

Aor13H I

<20

20

<20

80*

80

100

Aor51H I

80

100

<20

20

120

120

Apa I

100

<20

<20

<20

<20

120

ApaL I

100

20

<20

<20

120

120

Ava I

(<20)

100

20

40

100

120

Ava II

80

100

<20

20

100

100

Bal I

20

20

<20

<20

40

100

BamH I

(<20)

<20

40

100

(<20)

80

Ban II

(120)

(120)

100

80

(100)

100

Bcn I

<20

20

40

60

60

100

Bgl I

<20

<20

20

40

<20

100

Bgl II

<20

20

100

(100)

(60)

100

Bln I

<20

20

40

100

20

120

BmeT110 I

<20

<20

20

100

<20

140

BmgT120 I

<20

<20

100

40

<20

240

Bpu1102 I

<20

<20

<20

40

60

100

BspT104 I

100

60

<20

<20

100

120

BspT107 I

<20

20

80

100

20

100

Bsp1286 I

100

20

<20

<20

60

100

Bsp1407 I

20

60

20

20

100

100

BssHI I

100

100

60

20

140

100

BstP I

(<20)

(60)

100

(100)

(100)

100

BstX I

<20

40

100

<20

<20

120

Bst1107 I

(<20)

60

100

100

40

100

Cfr10 I

(<20)

(<20)

(<20)

40

(20)

100

Cla I

40

100

120

100

60

100

Cpo I

<20

<20

80

100

<20

100

Dra I

100

100

60

100

80

80

Eae I

60

100

<20

<20

120

160

EcoO65 I

(20)

(60)

60*

40

40

100

EcoO109 I

100

60

<20

<20

100

160

EcoR I

(20)

(100)

100

(120)

(80)

120

EcoR V

(<20)

(40)

100

(120)

(40)

100

EcoT14 I

(<20)

(40)

100

120

(60)

100

EcoT22 I

<20

20

100

(140)

(20)

120

Eco52 I

<20

<20

<20

<20

<20

100

Eco81 I

<20

100

<20

<20

100

160

Fba I

(<20)

(<20)

(80)

100

(20)

100

Fok I

(20)

(60)

<20

<20

(200)

100

Hae II

80

100

<20

80

140

100

Hae III

60

100

100

60

100

100

Hap II

100

60

<20

<20

100

80

Hha I

80

100

100

120

120

100

Hinc II

20

100

20

40

100

80

Hind III

(60)

100

<20

200

(100)

80

Hinf I

80

100

100

160

60

100

Hin1 I

40

80*

<20

20

60

160

Hpa I

<20

(40)

20

100

(80)

100

Kpn I

100

60

<20

<20

(100)

80

Mbo I

20

40

60

100

40

100

Mbo II

100

60

<20

<20

60

100

Mfl I

100

80

<20

<20

80

100

Mlu I

60

60

100

(100)

60

100

Msp I

80

80

<20

100

100

80

Mun I

(200)

100*

<20

<20

160

100

Mva I

(<20)

(40)

80

100

(20)

120

Nae I

100

<20

<20

<20

100

120

Nco I

(40)

(60)

20

60*

(60)

160

Nde I

<20

40

100

100

80

100

Nhe I

(120)

100

<20

<20

(160)

100

Not I

(<20)

(<20)

20**

<20

(<20)

100

Nru I

0

<20

20

20

<20

100

Nsb I

40

20

<20

60

100

100

PmaC I

100

80

<20

<20

100

100

PshA I

20

40

<20

100

60

160

PshB I

(20)

(40)

20

40

40

100

Psp1406 I

20

60

<20

<20

100

100

Pst I

(<20)

(60)

100

80

(20)

80

Pvu I

(<20)

(20)

(40)

80*

(40)

120

Pvu II

(80)

100

40

<20

(40)

100

Sac I

100

60

<20

<20

80

80

Sac II

40

20

<20

<20

100

40

Sal I

<20

<20

100

(20)

<20

120

Sau3A I

(60)

80

100

<20

(80)

100

Sca I

(<20)

(<20)

100

(60)

(<20)

100

Sfi I

(40)

100

<20

<20

100

100

Sma I

<20

<20

<20

<20

100

100

Smi I

<10

<20

100

40

<10

100

SnaB I

(20)

(40)

<20

<20

(40)

100

Spe I

(80)

100

80

100

(80)

100

Sph I

(20)

(40)

100

120

(20)

100

Sse8387 I

(120)

60*

<20

<20

(60)

100

Ssp I

(<20)

(60)

40

(100)

(80)

100

Stu I

60

100

60

80

140

100

Taq I

40

80

60

60

80

100

Tth111 I

(20)

80

40

100

(80)

120

Van91 I

<20

(20)

60

100

(60)

100

VpaK11B I

<20

<20

60

(40)

<20

100

Xba I

<20

80*

20

<20

120

120

Xho I

<20

60

100

160

60

100

Xsp I

<20

60

<20

100

160

100


하늘색: 제한효소와 함께 제공되는 universal buffer
분홍색: 대안으로 권장하는 buffer

*+0.01% BSA → 100% Afl II, EcoO65 I, Fok I, Hin1 I, Mun I, Nco I, Pvu I, Spl I, Sse8387 I, Xba I
**+0.01% BSA + 01% Triton X-100 → 100% Not I
*** Basal buffer의 조성은 효소별로 다릅니다.

■ Loading buffer 사용
모든 제한효소는 1% SDS, 50% glycerol, 0.05% bromophenol blue가 포함된 10X loading buffer (1㎖)가 함께 제공된다. 10X loading buffer의 1/10을 추가하여 제한효소 반응을 중지하고 agarose gel에 로딩한다.

(Note) SDS는 실온에서 보관하는 동안 침전물이 발생할 수 있다. 이 경우 미지근하게 데워 침전물을 녹인 후 사용한다.

■ Universal buffer 사용
Universal buffer는 10X 농도로 제공되며 반응액의 1/10 부피를 추가하여 사용한다.
10X T buffer에는 BSA가 포함되어 있지 않으므로, 최종농도 0.01%가 되도록 BSA를 첨가하여 반응에 사용한다.
일부 제한효소는 BSA나 Triton X-100을 반응액에 첨가하면 100% 활성을 나타내는 것으로 예측된다.
제한효소와 함께 제공되는 BSA와 Triton X-100는 10X 농도 (0.1%)로 제공되므로, 반응을 시작하기 전에 반드시 반응액의 1/10 부피만큼 추가해서 반응한다.

■ Universal buffer 조성

Universal buffer

Composition

10X L

100 mM Tris-HCl (pH 7.5)

100 mM MgCl2

10 mM Dithiothreitol

10X M

100 mM Tris-HCl (pH 7.5)

100 mM MgCl2

10 mM Dithiothreitol

500 mM NaCl

10X H

500 mM Tris-HCl (pH 7.5)

100 mM MgCl2

10 mM Dithiothreitol

1,000 mM NaCl

10X K

200 mM Tris-HCl (pH 8.5)

100 mM MgCl2

10 mM Dithiothreitol

1,000 mM KCl

10X T
(BSA-free)

330 mM Tris-acetate (pH 7.9)

100 mM Mg-acetate

5 mM Dithiothreitol

660 mM K-acetate

0.1% BSA dissolved in sterile water

0.1% Triton X-100