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Home > 전제품보기 > 제한효소 · Quickcut > 제한효소 > Double Digestion용 추천 Universal Buffer

Double Digestion용 추천 Universal Buffer

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주요 제한효소의 Double Digestion용 권장 Universal 버퍼
2종류의 제한효소로 동시에 기질 DNA를 절단하는 double digestion은 시간을 절약하는 방법으로써 일반적으로 이용되고 있다. TaKaRa는 Universal 버퍼를 공급함과 동시에 각 효소마다 사용하는 Universal 버퍼의 상대활성을 표시하고 있지만, 그 중에는 double digestion에 사용하는 Universal 버퍼의 선택이 곤란한 조합이 있다. 아래의 도표에 pUC계 플라스미드의 cloning site에 절단부위를 갖는 효소를 중심으로 double digestion에 최적인 Universal 버퍼 조건을 나타내었다. 도표 내용중 Universal 버퍼의 앞에기재한 [숫자×]는 각 버퍼의 최적농도를 의미한다. Universal 버퍼는 모두 10× 농도로 공급하므로 0.5×는 20배, 1×는 10배, 2×는 5배로 희석하여 사용해야 한다. 또 BSA도 10×농도(0.1%)이므로 10배로 희석하여 최종농도가 0.01%가 되도록 사용하여야 한다.
주1) 1 ㎍ DNA/ 50 ㎕ 반응액에 10 U의 효소를 첨가하여 37℃, 1시간 반응으로 완전 분해 가능하다.
주2) 반응액 중의 클리세롤 농도는 Star 활성을 가능한 한 억제하기 위하여 10% 이하로 사용한다.
주3) DNA의 종류, 고차구조, 인식부위가 인접해 있는 경우 등에서는 완전분해되지 않는 경우도 있다.