Application of RetroNectin® (Recombinant Human Fibronectin Fragment)

What is RetroNectin?
RetroNectin은 3개의 domain (cell-binding domain, heparin-binding domain, CS-1 sequence)으로 구성된 재조합 human fibronectin fragment (rFN-CH-296)이다.



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Code	제품명	용량
T100A	RetroNectin (Recombinant Human Fibronectin Fragment)	0.5 mg (0.5 ㎖)
T100B	RetroNectin (Recombinant Human Fibronectin Fragment)	2.5 mg (2.5 ㎖)
T110A	RetroNectin Dish（RetroNectin Pre-coated Dish, 35 mmφ）	10 dishes
T201	RetroNectin GMP grade Recombinant Human Fibronectin Fragment CH-296	2.5 mg

How does RetroNectin work?
RetroNectin은 lentivirus 또는 retrovirus를 이용한 유전자 도입시 virus 입자와 목적 세포간의 co-localization을 도와 유전자 도입효율을 높여준다. Virus 입자와 RetroNectin의 H-domain, RetroNectin과 목적 세포의 integrin receptor 간 결합 (세포의 VLA-4와 fibronectin CS-1 site 간 결합 또는 세포의 VLA-5와 fibronectin C-domain 간 결합)으로 세포와 virus가 물리적으로 가까워짐으로써 integrin receptors VLA-4 또는 VLA-5 발현 세포의 viral-mediated gene transfer 효율을 높일 수 있다.

• VLA-4 발현세포: T cells, B cells, 단핵백혈구 (monocytes), NK cells, 호산구 (eosinophils), 골수 단핵세포 (bone marrow monocytic cells), 림프구전구세포 (lymphoid progenitor) 등
• VLA-5 발현세포: 흉선세포 (thymocytes), activated T-cells, 비만세포 (mast cells) 등

[실험예 - 1] 인간 조혈모세포의 retrovirus 매개 유전자 도입: RetroNectin vs. Polybrene
Retrovirus를 이용해 녹색형광단백질 (GFP)유전자를 인간 조혈모세포에 도입한 결과, RetroNectin을 이용하였을 때 polybrene보다 높은 효율로 유전자를 도입할 수 있었다. (Application Note PDF 다운로드)


그림. GFP gene transfer efficiency using either RetroNectin or polybrene.
A: Analysis of fluorescence by flow cytometry of CD34+ cells after retroviral transduction. GFP expression is plotted on the x-axis of the histograms.
B: Transduction efficiency, as determined by the percentage of CD34⁺ cells that express GFP, using either the polybrene method or the RetroNectin reagent method.

[실험예 - 2] Retrovirus를 이용한 인간 줄기세포의 유전자 도입방법 비교
Retrovirus를 이용하여 인간 줄기세포에 형광단백질 유전자를 도입할 때 RetroNectin, Polybrene, Protamine의 유전자 도입효율을 비교하였다.
RetroNectin을 이용한 경우, 다른 방법에 비해 바이러스 도입효율을 비약적으로 높일 수 있었고, 특히 hCD34⁺, hADSC와 같이 GaLV envelope receptor (Pit 1)의 발현이 낮은 줄기세포에서도 유전자 도입효율이 높은 결과를 확인하였다. (Application Note PDF 다운로드)


그림. Comparison of the efficiency of various transduction methods in human stem cells.

RetroNectin reagent also can be used to enhance T cell expansion in vitro.
말초혈액 단핵세포 (peripheral blood mononuclear cells; PBMCs)로부터 T 림프구를 확대배양할 때 interleukin-2 (IL-2)와 anti-CD3 antibody를 이용한다. 이때 RetroNectin을 이용하면 T cell 확대배양 효율을 비약적으로 높이고, naive T cell의 비율이 높은 T cell을 확보할 수 있다. (Application Note PDF 다운로드)


그림. RetroNectin reagent (RN) increases expansion and naive T-cell fraction of PBMCs stimulated with anti-CD3 antibody and IL2. Peripheral blood T cells stimulated and expanded in vitro with anti-CD3 antibody (OKT3 clone) and IL2 for 10 days contained approximately twofold higher naive T cells (CD45RA⁺/CCR7⁺ phenotype) in the presence of immobilized RN than in the absence of RN.

RetroNectin® GMP Grade Reagent for ex vivo Gene Therapy
RetroNectin GMP Grade은 임상시험용의약품 (Investigational Product)을 위해 GMP 가이드라인을 준수한 시설에서 생산된 고품질 시약으로 별도의 물질 이전계약 (Materal Transfer Agreement; MTA)없이 ex vivo 임상시험에 사용할 수 있다.

[RetroNectin® GMP Grade Reagent 의 임상 활용 예] (Application Note PDF 다운로드)

• Adoptive Cell Therapy
• T cell Immunotherapy for Acute Lymphoblastic Leukemia
• T cell Expansion and Stimulation
• Transduction of CD34⁺ Hematopoietic Stem Cells

그림. RetroNectin Reagent & Gene Therapy Research