[In-Fusion^® Cloning]

In-Fusion^® Cloning은 vector와 insert를 같은 제한효소로 절단한 뒤 ligase로 연결하는 기존의 Cloning 방법과는 다른 방법입니다. 

아래 그림과 같이 Cloning 하고자 하는 vector와 insert의 양 끝의 15bp의 서열이 일치하기만 하면 되기 때문에 vector나 insert의 제한효소 위치를 고려하지 않아도 됩니다.

[In-Fusion^® Cloning 실험원리]

1. Insert를 PCR로 준비하는 과정에서 primer의 5’ 말단에 사용하고자 하는 선형화 된 vector*의 말단 서열을 추가해서 증폭
*inverse PCR 또는 제한효소로 선형화

2. In-Fusion^® enzyme으로 선형화 된 vector와 insert의 상동서열끼리 연결
- 효소의 3’ → 5’ exonuclease 활성으로 sticky end 형성
- 이후 15bp 상동서열의 sticky 부분이 상보적으로 결합

3. Cloning 과정에 vector와 insert 사이에 남은 nick을 comp.cell 안에서 수복

위 그림처럼 Cloning 과정에서 제한효소 서열이 관여하지 않기 때문에 ligase를 사용한 Cloning처럼 제한효소 인식 서열을 고려할 필요가 없습니다.

실험의 전체적인 과정 및 원리는 아래의 동영상에서도 확인하실 수 있습니다.

-       In-Fusion^® Cloning mechanism

In-Fusion^® Cloning을 위한 primer 디자인 온라인 툴도 쉽게 활용해보세요!

-       In-Fusion^® primer design tool

15분만에 완성되는 편리하고 정확한 In-Fusion^® Snap Assembly Master Mix (Code 638947) 와

 

뛰어난 Nick 수복 능력으로 In-Fusion® 실험 시 가장 높은 효율을 보이는 Stellar™ Competent Cells (Code 636763) 과 함께 사용하여 cloning 효율을 향상시킬 수 있습니다.

제품 문의사항은 고객지원 (02-2081-2510, support@takara.co.kr) 로 연락 바랍니다. 

감사합니다.

다카라코리아 드림.