• 30분 내 고순도로 농축된 EV 분리 - 최대 850 ㎕의 혈장, 타액, 뇌척수액 등 체액 샘플, 세포 배양 상층액
• 분리된 EV의 Exosome protein 특이적 마커 발현 확인 - non-exosomal 단백질의 혼입 낮음
• 많은 양의 EV 분리 - exosomal RNA를 이용한 RT-qPCR, NGS 분석 적용
• 손상 없이 EV 분리 - 투과 전자 현미경 (TEM)을 통해, 분리 후 EV 형태 유지 확인

제품설명

Capturem™ Extracellular Vesicle Isolation Kit는 소량의 체액 샘플로부터 exosome과 같은 EV (Extracellular vesicle)를 간편하고 신속하게 분리할 수 있다. 특수하게 제작된 Capturem™ spin column을 사용하면 항체를 사용하지 않고, lectin 기반의 결합물질을 이용해 혈장, 타액, 뇌척수액과 같은 체액 혹은 세포 배양 상층액으로부터 30분 이내에 고순도로 농축된 EV를 분리할 수 있다. 회수된 EV는 단백질 분석, 유전자 분석, 전사체 분석에 적용하기에 충분한 양이다.


그림 1. Capturem™ Extracellular Vesicle Isolation Kit를 이용한 빠른 EV 정제 과정.
Pre-clearing과정에서 샘플 내 오염 물질을 제거하고, EV가 아닌 단백질을 제거하기 위하여 filtration을 한다. 그 후, 샘플 내의 EV을 Capturem의 membrane에 결합시킨 후, 각 단계에 적합한 버퍼를 이용해 Wash, Elute 과정을 진행한다. 모든 과정에는 2분간의 짧은 원심분리가 필요하다. (*Filtration 시간은 샘플의 종류와 양에 따라 달라질 수 있다.)


그림 2. 분리된 EV (Extracellular Vesicle)의 크기 별 분포 비교.
Capturem™ Extracellular Vesicle Isolation Kit와 초원심분리기를 이용해, 혈장 샘플 (N=3, 500 ㎕)에서 EV를 분리하여 나노 입자 추적 분석 (NTA)을 실시하였다. EV 크기의 평균을 검정선, 표준 오차를 빨간선으로 표시하였다. 초원심분리기를 이용하여 분리된 EV (Extracellular Vesicle) 샘플에 비해 Capturem™을 사용했을 때, 일반적인 EV의 크기 기준으로 사이즈 분포 범위가 좁았다. 이는 Capturem™을 사용했을 때 보다 고순도의 EV가 분리되었음을 알 수 있었다.


그림 3. 다양한 샘플에서의 EV (Extracellular Vesicle) 분리 예.
모유, 타액, 뇌척수액 (CSF), 혈청, 소변, 세포 배양 상층액에서 Capturem™ Extracellular Vesicle Isolation Kit를 이용해 EV를 분리한 후, 나노 입자 추적 분석 (NTA)을 실시하였다. EV의 평균 크기를 검정선, 표준 오차를 빨간선으로 표시하였다. 모든 샘플에서 EV가 분리되었으며, Capturem™이 다양한 샘플의 EV 분리에 이용될 수 있음을 확인하였다.


그림 4. Exosome marker와 Non-exosome 단백질의 검출
Capturem™ Extracellular Vesicle Isolation Kit와 초원심분리기를 이용해 혈장에서 EV를 분리한 후, exosome marker인 CD63, CD9, Alix와 non-exosome 단백질인 calnexin, albumin을 western blotting으로 검출하였다. Capturem™을 이용해 분리한 EV에서는 exosome marker인 CD63, CD9, Alix의 발현을 확인할 수 있었고, non-exosome 단백질인 calnexin, albumin의 발현이 상대적으로 낮았다.


그림 5. RNA 수율의 비교
혈청을 이용하여 두 가지 방법으로 EV를 추출하였다 (Capturem™ 50 ㎕, 초원심분리기 300 ㎕). 분리된 EV에서 NucleoSpin miRNA Plasma (MN)을 이용해 miRNA를 정제한 후, Bioanalyzer에서 RNA 수율을 확인했다 (Internal standard = 25 nt peak). 두 방법으로 각각 분리한 EV에서 추출한 RNA 양은 차이가 없었고, 동일한 농도가 확인되었다.

적용

구성품 (자세한 내용은 CoA를 참조하세요)

보존 실온