Lentivirus 벡터 선택가이드
당사는 다양한 application에 적용 가능한 다양한 lentivirus expression vector를 제공하고 있다. 이 벡터들은 Lenti-X™ 시리즈의 시스템에서 가장 핵심적인 제품으로 대부분의 mammalian cell type에 적용이 가능하다 (dividing 및 non dividing cell, primary cell, stem cell, neuron 포함). 이러한 Lenti-X™ 시리즈에 lentivirus expression vector인 pLVX 시리즈는 HIV-1 LTR과 lentiviral packaging signal (Ψ)을 가지고 있고 이외에도 transgene의 발현량, 바이러스 역가, 바이러스의 functionality를 높이기 위한 다양한 서열들이 추가되어 있다.
- WPRE: woodchuck hepatitis virus posttranscriptional regulatory element의 약자로 poly(A) 서열의 readthrough를 방지하고, RNA의 processing및 maturation 과정에 기여하여 nuclear export를 촉진한다. Genomic transcript에서 이 서열이 expression vector의 packaging을 촉진하여 고역가의 lentivirus 생산하는데 기여하고, lentivirus의 transduction시에는 이 서열이 transgene의 발현에 기여하게 된다.
- cPPT/CTS: central polypurine tract/central termination sequence의 약자로 “DNA flap”을 형성하는 서열이다. “DNA flap”은 바이러스의 transduction 시 viral genome의 타겟 세포로의 nuclear import를 촉진하여 integration과 transduction 효율을 높이게 된다.
- RRE: Rev response element의 약자로 unspliced viral genomic RNA의 nuclear export를 촉진하여 고역가 바이러스 생산이 가능하도록 한다.
아래의 lentivirus expression vector는 당사의 4세대 Lentivirus 생산 시스템인
Lenti-X™ Packaging Single Shots (Code 631275)을 사용하는 경우 간단한 프로토콜로 안전하고 쉽게 고역가의 lentivirus를 생산할 수 있다.
■ CMV 프로모터로 목적 유전자를 발현하는 lentivirus expression vector
이 벡터는 강력한 constitutive promoter인 CMV 프로모터로 lentivirus 안에 있는 목적 유전자를 발현하는 벡터이다.
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■ EF1α 프로모터로 목적 유전자를 발현하는 lentivirus expression vector
이 벡터는 CMV promoter가 silence되는 일부 cell type (e.g. hematopoietic cell, stem cell 등)에 적용하기 위한 EF1α 프로모터의 lentivirus 시스템이다.
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■ Tet-On® 3G를 사용한 inducible expression용 lentivirus expression vector
이 벡터는 TRE3G promoter를 사용해 lentivirus 안에 있는 목적 유전자를 원하는 시점에서 매우 고감도로 inducible expression하는것이 가능하다. Regulator Vector와 Response Vector를 별도로 준비하는 2 벡터 시스템과 all-in-one 벡터 시스템 두 종류로 판매되고 있다.
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Lentivirus, Tet-on® inducible Expression (Two vectors)
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Lentivirus, Tet One™ Inducible Expression (One vector)
■ Protein의 stability를 조절해 발현량을 조절하는 ProteoTuner를 사용한 lentivirus expression vector
이 벡터의 ProteoTuner destabilization domain (DD)의 downstream에 있는 MCS에 목적 유전자를 cloning 하면 해당 유전자의 단백질의 stability를
Shield 1 (Code 632189)으로 조절할 수 있다. 이를 통해 목적 단백질의 발현 수준을 정밀하고 신속하게 조절이 가능하다.
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■ 형광 단백질을 발현하는 lentivirus expression vector
이 벡터는 lentivirus 안에 형광 단백질과 목적유전자를 같이 발현 (fusion protein)하기 때문에 해당 유전자의 발현과 함께 subcellular localization을 같이 확인할 수 있다.
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