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RNA 추출과정 없이 세포에서 직접 유전자 발현 분석

CellAmp™ Direct TB Green™/ Probe RT-qPCR Kit

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제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Takara
3735A
CellAmp™ Direct TB Green™ RT-qPCR Kit
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1 Kit
1,330,000원  3735A_e.v1702Da.pdf, 3735S_e.v1702Da.pdf
Takara
3735S
CellAmp™ Direct TB Green™ RT-qPCR Kit
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1 Kit
399,000원 
Takara
3736A
CellAmp™ Direct Probe RT-qPCR Kit
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1 Kit
1,242,000원  3736A_e.v1709Da.pdf, 3736S_e.v1709Da.pdf
Takara
3736S
CellAmp™ Direct Probe RT-qPCR Kit
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1 Kit
369,000원 

* 본 제품의 제품명은 TB Green™으로 사전 예고 없이 변경될 수 있습니다.
  자세한 사항은 [공지] Takara 시약 제품명 변경 예고를 참고해 주십시요.

  • 최소 1.5시간 만에 고효율(high-throughput)로 샘플의 유전자 발현 분석 가능
  • 줄기세포, iPS에서 분화시킨 세포에도 효과적으로 사용 가능
  • 세포용해물(Cell lystate)는 장기간 보관 가능
  • PCR 저해물질에 대한 강한 저항성과 높은 특이성
  • TB Green™과 Probe의 두 가지 검출 방식 형태
제품 설명
본 제품은 96 well 혹은 다양한 형태의 plate에서 배양된 동물세포 (adherent cells, non-adherent cells, primary cells, stem cells, iPS cells, etc.)로부터 RNA 추출 과정 없이 간단한 방법으로 2-step real-time RT-PCR을 수행 할 수 있다. 본 제품을 사용하면 분석에 필요한 주형 준비와 역전사과정, real-time PCR을 1.5시간 이내에 수행할 수 있다. 또한, 본 제품은 genomic DNA를 효과적으로 제거할 수 있기 때문에 genomic DNA가 오염된 샘플(또한, Exon 접합의 Primer 디자인이 불가능한 경우, 낮은 유전자 발현 등)에도 효과적이다. Two-step real-time RT-PCR을 위한 TB Green™ 검출 또는 Dual Labeled-probe 검출 방식의 reagent가 포함되어 있고, 불필요한 과정이 생략되어 쉽게 유전자 발현 분석이 가능하다.
제품 특징
1. 최소 1.5시간에 고효율로 유전자 발현 분석 가능
본 제품을 사용하면 Real-time PCR 주형을 RNA의 정제 과정 없이 세포로부터 직접 준비가 가능하다. 또한, 기존의 제품 (CellAmp™ Direct RNA Prep Kit for RT-PCR (Real Time) Code 3732)와 달리, 역전사 과정 전 DNase inactivation을 위한 열처리 과정이 필요 없다. 또한 실험 절차가 간단하여, 고효율(high-throughput)분석 에 적합한 제품이다.

2. 줄기세포(예: iPS cells)로 분화된 세포의 분석시 적합
본 제품은 향상된 Lysis Buffer II를 사용하여 다양한 형태의 세포주(adherent cells, non-adherent cells, primary cells, stem cells, iPS cells, etc)에 사용 가능하다.

3. 세포 용해물(Cell lysates) 장기간 보관 가능
본 제품으로 제조한 세포 용해물은 -20℃에서 최대 6개월 보관 가능하다.

4. 높은 정확도와 PCR 억제물질에 대한 저항성
본 제품에 사용된 TB Green™ Fast qPCR Mix (Code RR430)와 Probe qPCR Mix (Code RR391)은 PCR 억제물질에 강력한 저항성을 가지고 있으며, GC-rich template에서도 높은 정확도를 나타낸다.
내용

 

구성품명

3735A / 3736A

3735S / 3736S

1.

CellAmp Washing Buffer*1

2.5 ml × 5

2.5 ml

2.

CellAmp Lysis Buffer II*1

1 ml × 5

1 ml

3.

DNase I for Direct RNA Prep*1

200 μl

40 μl

4.

Stop Solution*1

250 μl

50 μl

5.

PrimeScript RT Enzyme Mix*2

200 μl

40 μl

6.

5 × CellAmp Buffer II*2

400 μl

80 μl

7.

RT Primer Mix*2,3

100 μl

20 μl

8.

RNase Free H2O*2

1 ml × 2

1 ml

9.

TB Green™ Fast qPCR Mix (2×) (3735A / S)*4
Probe qPCR Mix (2×) (3735A / S)*4

625 μl × 10

625 μl × 2

10.

ROX Reference Dye (50×)*5

250 μl

50 μl

11.

ROX Reference Dye II (50×)*5

250 μl

50 μl


*1

Cell Lysis 용 시약

3735A / 3736A 100 회

3735S / 3736S 20 회

*2

RT (역전사) 시약

3735A / 3736A 100 회

3735S / 3736S 20 회

*3

Oligo dT Primer, Random 6 mers를 포함한다.

*4

qPCR 시약

3735A / 3736A 500 회

3735S / 3736S 100 회

*5   Life Technologies의 Real Time PCR 장치 등 well 간 형광 신호를 보정하는 장치로 해석하는 경우에 사용한다.
  • ROX Reference Dye (50×)을 첨가하는 기종
    Applied Biosystems 7300 Real-Time PCR System (Life Technologies)
    StepOnePlus Real-Time PCR System (Life Technologies)
  • ROX Reference Dye II (50×)을 첨가하는 기종
    Applied Biosystems 7500/7500 Fast Real-Time PCR System (Life Technologies)
  • 첨가가 필요 없는 기종
    Thermal Cycler Dice Real Time System III (Code TP950/TP970/TP980)
    Thermal Cycler Dice Real Time System II (Code TP900/TP960)
    Thermal Cycler Dice Real Time System Single (Code TP850/TP870)
    Thermal Cycler Dice Real Time System Lite (Code TP700/TP760)
    Smart Cycler System/Smart Cycler II System (Cepheid사)
    LightCycler 96/LightCycler 480 System (Roche Diagnostics사)
    CFX96 Real-Time PCR Detection System (Bio-Rad사)
보존
-20℃

CellAmp Washing Buffer 및 CellAmp Lysis Buffer II
융해 후 4℃에 보관하시고, 오염에 주의 하십시오.

3735S / A : TB Green™ Fast qPCR Mix(2x)
4℃ 보관시 6개월 안정하며, 반드시 차광하여 보관 하십시오.
- 장기 보존의 경우는 -20 ℃에서 보관하십시오. 한번 해동한 TB Green™ Fast qPCR Mix (2 x)는 4℃ 보관하고
6개월 안에 사용할 것을 권장합니다.
- 사용전 완전히 녹인 후 균일하게 혼합하여 사용하시기 바랍니다.

3736S / A : Probe qPCR Mix(2x)
4℃ 보관시 6개월 안정하며, 반드시 차광하여 보관 하십시오.
- 장기 보존의 경우는 -20 ℃에서 보관하십시오. 한번 해동한 Probe qPCR Mix (2 x)는 4℃ 보관하고
6개월 안에 사용할 것을 권장합니다.
- 사용전 완전히 녹인 후 균일하게 혼합하여 사용하시기 바랍니다.
Flow Chart

iPS 세포 유래 심근세포를 사용한 실험 예
CellAmp™ Direct TB Green™ RT-PCR Kit (Code 3735)의 실험 예

<실험방법> iPS cells을 Cardiomyocyte로 분화유도를 하였다. 분화유도 5일, 18일, 42일 후, 1x104 cells의
샘플을 사용하여 본 제품의 프로토콜에 따라 세포용해물 50 μl로 준비하였다. 역전사 반응과 Real-Time PCR 과정도 제시된 프로토콜에 따라 진행하였고, 제시된 방법에 따라 유전자 발현 분석을 수행하였다. 똑같은 1x104 cells에서 정제된 total RNA를 준비하여 control로 사용하였고, 같은 방식을 사용하여 유전자 발현 분석을 수행하였다.


<결과> Day 5의 유전자 발현량을 1로 하여 Day 18과 Day 42의 유전자 발현량을 비교하였다. 유전자 발현의 profile은 본제품을 사용한 세포용해물과 고순도 RNA를 사용한 결과가 유사하다는 것이 확인 되었다.

CellAmp™ Direct Probe RT-qPCR Kit (Code 3736)의 실험 예

<실험방법>본 제품을 사용하여 1x104 cells의 다양한 세포 (HeLa, Jurkat, 239, normal human dermal
fibrolast (NHDF)), 그리고 iPS cell로부터 분화된 cardiomyocyte (CM))로부터 제시된 프로토콜에 따라 50 μl의 세포용해물을 준비하였고, 역전사과정과 Real-Time PCR과정 또한 프로토콜에 따라 수행하였다. 동일한 sample에서 total RNA (1x104 cells)을 정제/추출하여 control로 사용하고 같은 방식으로 유전자 발현 분석을 실시하였다.


<결과> 다양한 동물 세포의 유전자 발현 profile은 본제품을 사용한 세포용해물과 고순도 RNA를 사용한 결과가 유사하다는 것이 확인 되었다.

Keyword :
-
Real Time PCR 관련 제품
간단하게 조제한 Lysate에서 mRNA와 단백질의 발현 ..
> CellAmp™ Direct Prep Kit for RT-PCR (Real Time) & Protein Analysis
배양세포로부터 간단하게 1 Step Real Time RT-PCR ..
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1 개의 세포로부터 template cDNA를 증폭 가능
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