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Spin column타입으로 빠르고 간편한 His-tag 단백질 정제

Capturem™ His-Tagged Purification

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제조사 제품코드 제품명 용량 가격
(부가세별도)
비고 사용자매뉴얼
Clontech
635710
Capturem™ His-Tagged Purification Miniprep Kit
관련학술 관심상품등록 구매하기 라이선스 
20회
362,000원  제조사 페이지로 바로가기 Capturem His-Tagged Purification Miniprep Kit Protocol-At-A-Glance_042716.pdf, xTractor Buffer Baculovirus Sample Preparation Protocol-At-A-Glance_031616.pdf
Clontech
635713
Capturem™ His-Tagged Purification Maxiprep Kit
관련학술 관심상품등록 구매하기 라이선스 
6 회
455,000원  제조사 페이지로 바로가기 xTractor Buffer Mammalian Sample Preparation Protocol-At-A-Glance_031616.pdf, xTractor Buffer Bacterial Sample Preparation Protocol-At-A-Glance (PT3735-2)_031716.pdf
Clontech
635719
Capturem™ His-Tagged Purification Maxiprep Columns
관련학술 관심상품등록 구매하기 라이선스 
50개
1,905,000원  제조사 페이지로 바로가기 Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Columns Protocol-At-A-Glance_042716.pdf, xTractor Buffer Bacterial Sample Preparation Protocol-At-A-Glance (PT3735-2)_031716.pdf
Clontech
635724
Capturem™ His-Tagged Purification Large Volume
관련학술 관심상품등록 구매하기 라이선스 
4 회
758,000원  제조사 페이지로 바로가기 Capturem His-Tagged Purification Large Volume Protocol-At-A-Glance_061317.pdf
Clontech
635714
Capturem™ His-Tagged Purification 96
관련학술 관심상품등록 구매하기 라이선스 
1 plate
670,000원  제조사 페이지로 바로가기 Capturem His-Tagged Purification 96 Protocol-At-A-Glance_042716.pdf, xTractor Buffer Baculovirus Sample Preparation Protocol-At-A-Glance_031616.pdf
Clontech
635730
Capturem™ His-Tagged Purification 24-Well Plate
관련학술 관심상품등록 구매하기 라이선스 
1 plate
693,000원  제조사 페이지로 바로가기 Capturem His-Tagged Purification 24-Well Plate Protocol-At-A-Glance_040518.pdf

Tip. 더욱 효율적인 단백질 추출과 정제를 위하여 xTractor Buffer 매뉴얼의 Lysis protocol(클릭)을 참조하세요.

  • 차세대 Capturem™ membrane 기술을 적용한 His-tagged protein 정제
  • No-waiting workflow: 실온에서 15분 - 30분이면 정제 완료
  • Bed-volume이 작아 고순도, 고수율, 고농도의 단백질 추출 가능
  • 비변성 및 변성 조건 (EDTA, 환원제, 글리세롤 등)에서도 정제 가능
  • Lysis compatibility: xTractor Buffer, 또는 타사의 lysis buffer에도 호환
  • 용량별로 4가지 타입 제공: Miniprep, Maxiprep, 24well plate, 96well plate, Large volume
제품설명
Capturem™ His-tagged Purifcation 시리즈는 차세대 멤브레인 기술을 적용하여 His-tagged protein을 정제할 수 있는 혁신적인 제품으로써, High-capacity Ni-NTA Capturem™ membranes이 차용되어있다. 기존의 metal affinity resin에 비하여 보다 다양한 샘플 (박테리아, 포유류 적용 가능)과 다양한 조건 (비변성 또는 변성 조건 (8M urea, 6M Guanidine-HCl)에서도 적용이 가능하다.
Capturem™ 시리즈는 레진을 이용한 정제와는 달리 빠른 시간 내에 실온에서 조작하기 때문에 단백질의 분해(degradation), 응집 (aggregation), 실활 (loss of activity) 등의 단백질
열변성, 불활성화에 대한 위험을 감소시킬 수 있다. 또한 Bed volume이 작고 (2ul: Miniprep), Binding capacity가 높아 ( 75 mg/cm3), 고순도, 고농도의 단백질을 정제할 수 있다. Capturem™ His-tagged Purifcation 시리즈는 아래와 같이 Miniprep, Maxiprep, 24well plate, 96well plate, Large volume으로 제공된다 (표 1).

표 1. Capturem™ His-tagged protein purification kit 시리즈 비교

 

Miniprep Kit

Maxiprep Kit

96well plate

24well plate

Large volume

Code

635710

635713

635714

635730

635724

형태

Mini Spin Column
Miniprep Column

Maxiprep Nickel Column
Maxiprep column

96 Nickel Plate
96 Nickel plate


24 Nickel plate

Large Volume Unit
Large volume unit

Input sample

~ 800 ㎕

~ 25 ㎖

~ 1,000 ㎕

~ 4 ㎖

150 ~ 500 ㎖

용량

20 회

6 회

96 well

24 well

4 회

소요시간

5 분

15 분

15 분

15분

15 ~ 30 분

정제농도

0.3 ~ 1 ㎎/㎖

1.6 ~ 4.5 ㎎/㎖

0.3 ~ 1 ㎎/㎖

~ 0.8 ㎎/1㎖

up to 2.0 ㎎/㎖

정제수율***

80㎍/column

1.5 ㎎/tube

80㎍/well

800㎍/well

10~25 ㎎/unit

Centrifuge
조건

11,000 x g, 1분

2,000 x g, 3분*

2,000 x g, 3분*

600 x g, 2분*

X

Vacuum 여부

X

X

O

O

O**

Buffer
포함 여부

O

O

X

X

X


* Maxiprep Kit에는 50㎖ tube용, 24well plate, 96well plate에는 각각 24well plate, 96well plate용 centrifuge가 필요합니다.
** Large volume의 경우, Vacuum source (e.g. vacuum pump equipped with a trap and a vacuum controller, or a peristaltic pump)가 필요하다.
*** 정제수율은 사용하고자 하시는 Sample type, species, antibody isotype에 따라 달라질 수 있습니다.


그림 1. Capturem His-Tagged Purification 시리즈의 Workflow
xTractor Buffer를 Capturem™ 컬럼에 첨가하여 Equilibration을 진행 후, His-tagged protein을 첨가하고 결합시킨다. 뒤이어 Washing Buffer를 이용하여 세척 및 원심분리 후
Elution Buffer를 이용하여 용출한다. Miniprep과 96well plate 타입의 경우는 Elution buffer 100ul를, Maxiprep의 경우는 Elution buffer 500ul를 사용하여 90%이상 Elution 가능하다.

표 2. Capturem His-Tagged Purification 시리즈의 Buffer의 조성
Buffer

조성

Lysis Buffer

xTractor Buffer (Code 635625) 사용 권장. Standard lysis buffer도 사용 가능.

Wash Buffer

150 mM NaCl , 20 mM Na3PO4, pH 7.6

Elution Buffer

500 mM NaCl , 20 mM Na3PO4, 500 mM imidazole, pH7.6



그림 2. Capturem™ His-tagged Purification 제품의 Membrane technology
장시간을 필요로 하는 레진 정제에 비해, Capturem™ membrane은 표면적과 용량 (Capacity)가 크기 때문에 빠른 시간 내에 막 통과가 가능하므로 단백질 변성이 없는 단백질을 정제 가능하다. 또한 낮은 압력으로 용액이 통과할 수 있으므로 단백질의 품질 저하를 방지하며, Bed volume이 작아 고순도로 정제할 수 있다.

표 3. Reagents Compatible with His-Tagged Purification Miniprep Kits
Reagent

Compatibility

MOPS

200 mM

HEPES

200 mM

Tris

200 mM

EDTA

10 mM

Beta-mercaptoethanol

30 mM

DTT

10 mM

TCEP

5 mM

Guanidine-HCl

6 M

Urea

8 M

Nonionic detergent (Triton X-100)

2%

Nonionic detergent (Tween 20)

2%

Anionic detergent (SDS)

1%

Arginine

500 mM

Glycine

100 mM

Histidine

20 mM

Sodium chloride

2 M

Imidazole

40 mM

Glycerol

10%



그림 3. 포유류세포에서 발현시킨 his-tagged protein 정제
293T cell에 6x His-tagged MAPK1 또는 ADRB2 유전자를 포함한 플라스미드를 Transfection 후, Capturem™ His-Tagged Purification Miniprep Kit을 이용하여 단백질을 정제하였다. Equilibration을 완료한 컬럼에 Lysate 처리, Washing 후 Elution Buffer 300ul로 단백질을 용출하고 4-20% Polyacrylamide gel 전기영동 및 Western blotting을 진행하였다.
Ponceau S staining을 통하여 membrane 내의 모든 단백질이 검출되는 것을 확인할 수 있었으며, MAPK, ADRB2 특이적인 항체를 사용한 Western blot에서 각각의 정제된 단백질을
확인할 수 있었다.


그림 4. Capturem™ His-tagged Purification Large Volume
(왼쪽) Capturem His-Tagged Purification Large Volume Units (오른쪽) Bottle Thread Adaptor


그림 5. Capturem™ His-Tagged Purification Large Volume Unit 적용사진
(A) 33mm 지름의 입구를 가진 bottle에 설치한 Capturem His-Tagged Purification Large Volume Unit
(B) 6x His-GFPuv 단백질을 포함한 cell lysate를 Capturem unit에 로딩한 사진
(C, 위) 6x His-GFPuv 단백질을 포함한 cell lysate 로딩 후, washing을 한 membrane의 모습. 황록색을 띄고 있다.
(C, 아래) Elution 진행 후의 membrane의 색. 원래의 membrane 색인 흰색을 띄고 있다.
(D) 50㎖ tube에 elution을 완료한 6x His-GFPuv 단백질 용액
적용
  • Biochemical/enzymatic assays
  • Pull-down or other protein interaction assays
  • Confirmation screening
  • Protein/ligand affinity analysis
  • Crystallography or other structural analyses
  • Antibody production
  • Toxicology studies
  • Protein transfer to live cells
구성품 (자세한 내용은 CoA를 참조하세요)
Capturem His-Tagged Purification Miniprep Kit
Mini Spin Column

20개

xTractor Buffer

15ml× 2

Wash Buffer

10 ml

Elution Buffer

10 ml


Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Kit
Capturem Maxiprep Nickel Column

6개

Capturem Maxiprep Filters

6개

xTractor Buffer

200 ml

Wash Buffer

40 ml

Elution Buffer

15 ml


Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Columns
Capturem Maxiprep Nickel Column 25개×2

Capturem His-Tagged Purification 96
Capturem 96 Nickel Plate 1장

Capturem™ His-Tagged Purification 24-Well Plate
Capturem His-Tagged Purification 24-Well Plate 1장

Capturem His-Tagged Purification Large Volume
Capturem His-Tagged Purification Large Volume Unit 4개(2 Units per box)
Bottle Thread Adaptor 1개

*Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Columns, Capturem His-Tagged Purification Large Volume 및 Capturem His-Tagged Purification 96, Capturem™ His-Tagged Purification 24-Well Plate에는 Buffer가 포함되어있지
않습니다.

Keyword : His-tagged protein,히스택,His-tag protein,His-tag,단백질 정제,단백질,Capturem,정제
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