- 차세대 Capturem™ membrane 기술을 적용한 His-tagged protein 정제
- No-waiting workflow: 실온에서 15분 - 30분이면 정제 완료
- Bed-volume이 작아 고순도, 고수율, 고농도의 단백질 추출 가능
- 비변성 및 변성 조건 (EDTA, 환원제, 글리세롤 등)에서도 정제 가능
- Lysis compatibility: xTractor Buffer, 또는 타사의 lysis buffer에도 호환
- 용량별로 4가지 타입 제공: Miniprep, Maxiprep, 24well plate, 96well plate, Large volume
제품설명
Capturem™ His-tagged Purifcation 시리즈는 차세대 멤브레인 기술을 적용하여 His-tagged protein을 정제할 수 있는 혁신적인 제품으로써, High-capacity Ni-NTA Capturem™ membranes이
차용되어있다. 기존의 metal affinity resin에 비하여 보다 다양한 샘플 (박테리아, 포유류 적용 가능)과 다양한 조건 (비변성 또는 변성 조건 (8M urea, 6M Guanidine-HCl)에서도
적용이 가능하다.
Capturem™ 시리즈는 레진을 이용한 정제와는 달리 빠른 시간 내에 실온에서 조작하기 때문에 단백질의 분해(degradation), 응집 (aggregation), 실활 (loss of activity) 등의
단백질
열변성, 불활성화에 대한 위험을 감소시킬 수 있다. 또한 Bed volume이 작고 (2ul: Miniprep), Binding capacity가 높아 (
75 mg/cm3), 고순도, 고농도의 단백질을 정제할 수 있다.
Capturem™ His-tagged Purifcation 시리즈는 아래와 같이 Miniprep, Maxiprep, 24well plate, 96well plate, Large volume으로 제공된다 (표 1).
표 1. Capturem™ His-tagged protein purification kit 시리즈 비교
|
Miniprep Kit |
Maxiprep Kit |
96well plate |
24well plate |
Large volume |
Code |
635710 |
635713 |
635714 |
635730 |
635724 |
형태 |
Miniprep Column
|
Maxiprep column
|
96 Nickel plate
|
24 Nickel plate |
Large volume unit
|
Input sample |
~ 800 ㎕ |
~ 25 ㎖ |
~ 1,000 ㎕ |
~ 4 ㎖ |
150 ~ 500 ㎖ |
용량 |
20 회 |
6 회 |
96 well |
24 well |
4 회 |
소요시간 |
5 분 |
15 분 |
15 분 |
15분 |
15 ~ 30 분 |
정제농도 |
0.3 ~ 1 ㎎/㎖ |
1.6 ~ 4.5 ㎎/㎖ |
0.3 ~ 1 ㎎/㎖ |
~ 0.8 ㎎/1㎖ |
up to 2.0 ㎎/㎖ |
정제수율*** |
80㎍/column |
1.5 ㎎/tube |
80㎍/well |
800㎍/well |
10~25 ㎎/unit |
Centrifuge
조건 |
11,000 x g, 1분 |
2,000 x g, 3분* |
2,000 x g, 3분* |
600 x g, 2분* |
X |
Vacuum 여부 |
X |
X |
O |
O |
O** |
Buffer
포함 여부 |
O |
O |
X |
X |
X |
* Maxiprep Kit에는 50㎖ tube용, 24well plate, 96well plate에는 각각 24well plate, 96well plate용 centrifuge가 필요합니다.
** Large volume의 경우, Vacuum source (e.g. vacuum pump equipped with a trap and a vacuum controller, or a peristaltic pump)가 필요하다.
*** 정제수율은 사용하고자 하시는 Sample type, species, antibody isotype에 따라 달라질 수 있습니다.
그림 1. Capturem His-Tagged Purification 시리즈의 Workflow
xTractor Buffer를 Capturem™ 컬럼에 첨가하여 Equilibration을 진행 후, His-tagged protein을 첨가하고 결합시킨다. 뒤이어 Washing Buffer를 이용하여 세척 및
원심분리 후
Elution Buffer를 이용하여 용출한다. Miniprep과 96well plate 타입의 경우는 Elution buffer 100ul를, Maxiprep의 경우는 Elution buffer 500ul를
사용하여 90%이상 Elution 가능하다.
표 2. Capturem His-Tagged Purification 시리즈의 Buffer의 조성
| Buffer |
조성 |
Lysis Buffer |
xTractor Buffer (Code 635625) 사용 권장. Standard lysis buffer도 사용 가능. |
Wash Buffer |
150 mM NaCl , 20 mM Na3PO4, pH 7.6 |
Elution Buffer |
500 mM NaCl , 20 mM Na3PO4, 500 mM imidazole, pH7.6 |
그림 2. Capturem™ His-tagged Purification 제품의 Membrane technology
장시간을 필요로 하는 레진 정제에 비해, Capturem™ membrane은 표면적과 용량 (Capacity)가 크기 때문에 빠른 시간 내에 막 통과가 가능하므로 단백질 변성이 없는
단백질을 정제 가능하다. 또한 낮은 압력으로 용액이 통과할 수 있으므로 단백질의 품질 저하를 방지하며, Bed volume이 작아 고순도로 정제할 수 있다.
표 3. Reagents Compatible with His-Tagged Purification Miniprep Kits
| Reagent |
Compatibility |
MOPS |
200 mM |
HEPES |
200 mM |
Tris |
200 mM |
EDTA |
10 mM |
Beta-mercaptoethanol |
30 mM |
DTT |
10 mM |
TCEP |
5 mM |
Guanidine-HCl |
6 M |
Urea |
8 M |
Nonionic detergent (Triton X-100) |
2% |
Nonionic detergent (Tween 20) |
2% |
Anionic detergent (SDS) |
1% |
Arginine |
500 mM |
Glycine |
100 mM |
Histidine |
20 mM |
Sodium chloride |
2 M |
Imidazole |
40 mM |
Glycerol |
10% |
그림 3. 포유류세포에서 발현시킨 his-tagged protein 정제
293T cell에 6x His-tagged MAPK1 또는 ADRB2 유전자를 포함한 플라스미드를 Transfection 후, Capturem™ His-Tagged Purification Miniprep Kit을 이용하여 단백질을
정제하였다. Equilibration을 완료한 컬럼에 Lysate 처리, Washing 후 Elution Buffer 300ul로 단백질을 용출하고 4-20% Polyacrylamide gel 전기영동 및 Western blotting을
진행하였다.
Ponceau S staining을 통하여 membrane 내의 모든 단백질이 검출되는 것을 확인할 수 있었으며, MAPK, ADRB2 특이적인 항체를 사용한 Western blot에서 각각의
정제된 단백질을
확인할 수 있었다.
그림 4. Capturem™ His-tagged Purification Large Volume
(왼쪽) Capturem His-Tagged Purification Large Volume Units (오른쪽) Bottle Thread Adaptor
그림 5. Capturem™ His-Tagged Purification Large Volume Unit 적용사진
(A) 33mm 지름의 입구를 가진 bottle에 설치한 Capturem His-Tagged Purification Large Volume Unit
(B) 6x His-GFPuv 단백질을 포함한 cell lysate를 Capturem unit에 로딩한 사진
(C, 위) 6x His-GFPuv 단백질을 포함한 cell lysate 로딩 후, washing을 한 membrane의 모습. 황록색을 띄고 있다.
(C, 아래) Elution 진행 후의 membrane의 색. 원래의 membrane 색인 흰색을 띄고 있다.
(D) 50㎖ tube에 elution을 완료한 6x His-GFPuv 단백질 용액
적용
- Biochemical/enzymatic assays
- Pull-down or other protein interaction assays
- Confirmation screening
- Protein/ligand affinity analysis
- Crystallography or other structural analyses
- Antibody production
- Toxicology studies
- Protein transfer to live cells
구성품 (자세한 내용은 CoA를 참조하세요)
| Capturem His-Tagged Purification Miniprep Kit |
| Mini Spin Column |
20개 |
xTractor Buffer |
15ml× 2 |
Wash Buffer |
10 ml |
Elution Buffer |
10 ml |
| Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Kit |
| Capturem Maxiprep Nickel Column |
6개 |
Capturem Maxiprep Filters |
6개 |
xTractor Buffer |
200 ml |
Wash Buffer |
40 ml |
Elution Buffer |
15 ml |
| Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Columns |
| Capturem Maxiprep Nickel Column |
25개×2 |
| Capturem His-Tagged Purification 96 |
| Capturem 96 Nickel Plate |
1장 |
| Capturem™ His-Tagged Purification 24-Well Plate |
| Capturem His-Tagged Purification 24-Well Plate |
1장 |
| Capturem His-Tagged Purification Large Volume |
| Capturem His-Tagged Purification Large Volume Unit |
4개(2 Units per box) |
| Bottle Thread Adaptor |
1개 |
＊Capturem His-Tagged Purification Maxiprep Columns, Capturem His-Tagged Purification Large Volume 및 Capturem His-Tagged Purification 96,
Capturem™ His-Tagged Purification 24-Well Plate에는 Buffer가 포함되어있지
않습니다.
주요 샘플에 따른 xTractor Buffer Lysis Protocol
